[發(fā)明專利]一種能穩(wěn)定保存的人NT-proBNP制劑及其制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210364564.4
• 申請日: 2012-09-26
• 公開（公告）號: CN102879589A
• 公開（公告）日: 2013-01-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 許秀麗;田亞平;劉培;郝慶欽
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍總醫(yī)院
• 主分類號: G01N33/74
• 分類號: G01N33/74;G01N33/68;C12N15/70
• 代理公司: 北京君智知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 11305
• 代理人: 向華

1.一種能穩(wěn)定保存的人NT-proBNP制劑，其特征在于，其中的NT-proBNP保存在含0.1-1%BSA，20-50%甘油和5-20%甘露醇的PH7.0-8.0的PBS緩沖液中，其中的NT-proBNP是與標(biāo)簽蛋白進(jìn)行融合表達(dá)后經(jīng)酶切去除標(biāo)簽蛋白后得到的純NT-proBNP，其氨基酸序列如SEQ?No.1。

2.權(quán)利要求1所述的能穩(wěn)定保存的人NT-proBNP制劑用于制備檢測NT-proBNP的標(biāo)準(zhǔn)品的用途。

3.權(quán)利要求1所述的能穩(wěn)定保存的人NT-proBNP制劑的制備方法，其特征在于該方法包括如下步驟：在大腸桿菌中重組表達(dá)人NT-proBNP，其中NT-proBNP與標(biāo)簽蛋白融合表達(dá)，經(jīng)分離、酶切和純化得到人NT-proBNP后，將人NT-proBNP加入到以質(zhì)量體積比計含0.1-1%BSA，20-50%甘油和5-20%甘露醇的PH7.0-8.0的PBS緩沖液中，制備得到能穩(wěn)定保存的人NT-proBNP制劑。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的能穩(wěn)定保存的人NT-proBNP制劑的制備方法，其特征在于在表達(dá)人NT-proBNP時，采用大腸桿菌偏好的密碼子，其中編碼人NT-proBNP的核苷酸序列如SEQ?No.2。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的能穩(wěn)定保存的人NT-proBNP制劑的制備方法，其特征在于在表達(dá)人NT-proBNP時，培養(yǎng)大腸桿菌采用的碳源是以質(zhì)量體積比計1%甘油，氮源是以質(zhì)量體積比計0.5%酵母粉，0.5%蛋白胨和1%NH₄Cl，無機(jī)鹽添加物是5mM硫酸鎂，收菌時間為6小時。

6.一種在大腸桿菌中重組表達(dá)制備人NT-proBNP蛋白的方法，其特征在于在表達(dá)人NT-proBNP時，采用大腸桿菌偏好的密碼子，將NT-proBNP與標(biāo)簽蛋白一起融合表達(dá)，使用的編碼人NT-proBNP的核苷酸序列如SEQ?No.2。

7.根據(jù)權(quán)利要求7所述的在大腸桿菌中重組表達(dá)人NT-proBNP蛋白的方法，其特征在于培養(yǎng)大腸桿菌采用的碳源是以質(zhì)量體積比計1%甘油，收菌時間為6小時。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的在大腸桿菌中重組表達(dá)人NT-proBNP蛋白的方法，其特征在于培養(yǎng)大腸桿菌采用的氮源是以質(zhì)量體積比計0.5%酵母粉，0.5%蛋白胨和1%NH₄Cl。

9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的在大腸桿菌中重組表達(dá)人NT-proBNP蛋白的方法，其特征在于培養(yǎng)大腸桿菌采用的無機(jī)鹽添加物為5mM硫酸鎂。

10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的在大腸桿菌中重組表達(dá)人NT-proBNP蛋白的方法，其特征在于培養(yǎng)大腸桿菌采用的碳源是以質(zhì)量體積比計1%甘油，氮源是0.5%酵母粉，0.5%蛋白胨，1%NH₄Cl，無機(jī)鹽添加物為5mM硫酸鎂，收菌時間為6小時。