[發明專利]使用了熒光粒子的檢測對象物質的檢測方法

無效

• 申請號: 201210363993.X
• 申請日: 2012-09-26
• 公開（公告）號: CN103033492A
• 公開（公告）日: 2013-04-10
• 發明（設計）人: 渡邊裕也;笠置典之
• 申請（專利權）人: 富士膠片株式會社
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司 72002
• 代理人: 白麗;陳建全

技術領域

本發明涉及使用了熒光粒子的檢測對象物質的檢測方法。

背景技術

一直以來，作為對蛋白質、酶、無機化合物等進行定量的高靈敏度且容易的測定方法，廣泛使用熒光檢測法。該熒光檢測法是對被認為含有能被特定波長的光激發而發出熒光的檢測對象物質（待測物質）的試樣照射上述特定波長的激發光、并通過檢測此時的熒光來確認待測物質的存在的方法。另外，在待測物質不是熒光體時，還廣泛采取下述方法：使利用熒光色素進行標記并與待測物質特異性結合的物質與試樣接觸，之后與上述同樣地檢測熒光，由此確認該結合、即待測物質的存在。

在這種熒光檢測法中，為了提高檢測的靈敏度，已知有利用由等離子體共振產生的電場增強的效應的方法。該方法中，為了產生等離子體共振，準備在透明支撐體上的規定區域上設有金屬層的傳感芯片，對支撐體與金屬膜的界面從與支撐體的金屬層形成面相反面的一側以全反射角以上的規定角度入射激發光。通過該激發光的照射，在金屬層上產生表面等離子體。通過該表面等離子體的產生所帶來的電場增強作用使熒光增強，從而信噪比（信號/噪音比，S/N比）提高。利用表面等離子體激發的熒光檢測法（以下記為“SPF法”）與利用落射激發的熒光檢測法（以下記為“落射熒光法”）相比，信號增強度能獲得約10倍，可以以高靈敏度進行測定。

例如在專利文獻1所記載的求得待測物質的量的光信號檢測方法中，準備具有傳感器部的傳感芯片，并使試樣與傳感芯片的傳感器部接觸，其中所述傳感器部具備設于電介質板一個面的規定區域上的金屬層。通過該接觸，被賦予了與試樣所含待測物質的量相對應量的光響應性標記物質的結合物質結合在傳感器部上。接著，對規定區域照射激發光，檢測金屬層上產生的電場增強場內所產生的光響應性標記物質發出的光，從而求得待測物質的量。另外，該方法中，作為光響應性標記物質，還可以使用含有多個光響應物質而成的物質，以使得利用透過由光響應物質產生的光的光透過材料來防止在光響應物質接近金屬層時所產生的金屬消光。

另外，專利文獻2所記載的分析方法中，通過利用了針對待測物質的多種抗體的免疫分析，可以拓寬能夠定量的待測物質的濃度范圍。

現有技術文獻

專利文獻

專利文獻1：日本特開2010-190880號公報

專利文獻2：日本特開平10-90268號公報

發明內容

發明要解決的課題

在現有的利用了SPF法的免疫診斷系統中，為了減輕制品所含的試劑量等的不均，采用的是根據用與測定對象物發生反應的試驗區的信號值除于與試劑量成比例的對照區的信號值獲得的校正系數來校正測定結果的不均的手法。因此存在下述問題：如果由溫度等的變化所導致的信號變化是在試驗區的信號值和對照區的信號值獨立地發生變化時，即便使用該校正系數也無法正確地進行校正。一般來說是通過改變固定在基板上的抗體的量或者固定在標記上的抗體的量來調整由溫度等的變化所導致的信號變化率。具體地說，通過減少固定在基板上的抗體量進行調整，可以增大溫度依賴性。但是，也有即便改變固定在基板上的抗體量或固定在標記上的抗體量也無法調整由溫度等的變化所導致的信號變化率的情況。本發明要解決的課題就在于要消除上述現有技術的問題。即，本發明要解決的課題在于提供在利用了調整由溫度等的變化所導致的信號變化率的校正系統的熒光分析中、對照區的信號值與試驗區的信號值的溫度依賴性差異小的待測物質的檢測方法。

用于解決課題的手段

為了解決上述課題，本發明人等進行了深入研究，結果發現：通過使用下述熒光粒子進行熒光分析，可以減小對照區的信號值與試驗區的信號值的溫度依賴性差異，所述熒光粒子結合有能夠與待測物質結合的第1結合物質；和能夠與對第1結合物質具有結合性的第2結合物質結合但不與待測物質結合的第3結合物質。本發明基于上述發現而完成。

即，根據本發明，提供一種待測物質的測定方法，其包含下述工序：

（1）使待測物質和熒光粒子與存在于基板上的試驗區及對照區接觸、并使熒光粒子與待測物質發生反應的工序；

（2）對試驗區及對照區的熒光粒子的熒光進行測定的工序；

（3）使用對照區的熒光信號值對試驗區的熒光信號值進行校正的工序，

熒光粒子為結合有下述（i）和（ii）的結合物質標記熒光粒子：

（i）能夠與待測物質結合的1種以上的第1結合物質；

（ii）能夠與第2結合物質結合但不與待測物質結合的第3結合物質，

在對照區上固定有相對于第1結合物質可結合的第2結合物質。