[發明專利]一種同時測定牛奶中單諾沙星與氟甲喹的熒光方法

有效

• 申請號: 201210363582.0
• 申請日: 2012-09-26
• 公開（公告）號: CN102879368A
• 公開（公告）日: 2013-01-16
• 發明（設計）人: 劉小鳴;陳衛;馮仕云;周鵬;范大明
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N1/28;G01N1/38
• 代理公司: 北京同恒源知識產權代理有限公司 11275
• 代理人: 張水俤

技術領域

本發明涉及一種熒光光譜快速同時測定牛奶中單諾沙星與氟甲喹含量的方法，屬于乳制品快速檢測技術領域。

背景技術

近年來，隨著我國居民收入的提高和對乳制品消費觀念的轉變，食用乳制品的消費者人數逐年增加，我國的乳制品行業得到迅猛發展。然而從目前國內奶業的生產和加工狀況來看，我國乳制品的質量與安全現狀不容樂觀。首先由于我國乳牛的農場化養殖水平較低，大部分原料乳（約占80%）是來自乳牛散養戶，因此導致原料乳品質波動性很大。同時存在的乳中摻假、濫用抗生素等諸多問題也使得乳制品安全性存在重大隱患。

抗生素是由細菌、霉菌或其它微生物在生活過程中所產生的具有抗病原體或其它活性的一類物質。自1940年青霉素首次應用于臨床起，抗生素的種類已達幾千種。而臨床上常用的約有幾百種。抗生素在奶牛飼養業中被廣泛使用醫療乳房炎等疾病。由于抗生素在常壓下不受物理方法的破壞，因此如果對奶牛用藥不當或濫用抗生素，牛乳中就會發生抗生素殘留現象，并進一步轉移到人體內。長期食用殘留有抗生素的食品會引起人體的過敏、肝腎損傷等毒副作用。

單諾沙星（DANO）是一種具有廣譜抗菌活性的合成抗生素，它屬于喹諾酮類藥物的衍生物-氟喹諾酮類。氟甲喹（FLU）也是抗菌性的藥物，屬于喹諾酮類藥物。它們的機理是作用是抑制細菌DNA旋轉酶，使酶不能在DNA雙鏈上引入切口，從而阻止細菌的代謝繁殖。目前，這兩種抗生素已經被廣泛用于食用動物的治療、防治疾病從而增加動物的產量，但是過量使用或使用不當會造成動物源性產品的藥物殘留，會對人體的中樞神經系統及關節等造成危害，從而引起人們廣泛關注。隨著奶牛飼養業的發展，喹諾酮類抗生素在預防和治療奶牛疾病方面得到廣泛應用，牛乳中抗生素的殘留問題也隨之而來，其不僅會對人的健康帶來很大危害，而且對乳制品企業帶來經濟損失，因此嚴格控制牛奶中的抗生素殘留量是很重要的一步。歐盟對鮮牛乳中四種喹諾酮類抗生素的殘留量已經有明確的規定，單諾沙星（30μg/kg）、氟甲喹（50μg/kg）、恩諾沙星（100μg/kg）和麻保沙星（μg/kg）等。

目前，牛乳中抗生素殘留量的檢測方法主要有微生物檢測法（TTC法、紙片法等）、理化檢測法（HPLC法、LC-MASS法等）和免疫學分析法（ELISA法等），但這些方法各自都有一定的缺點。微生物檢測法的缺點是檢測周期長，操作復雜等；理化檢測法的缺點是前處理繁冗，耗時長等；免疫檢測法則是對試劑選擇性高，很難同時分析多種成分，對結構類似的化合物有一定程度生物交叉反應等。在眾多分析方法中，熒光光譜法因其快捷簡便、高靈敏度等優點而成為很好的選擇，國外也已有學者利用此方法對牛乳中單組分抗生素（DANO）殘留量進行檢測分析，但并沒有對牛乳中DANO和FLU兩種抗生素的同時檢測的報道，所以本發明采用熒光光譜法實現對牛乳中的DANO和FLU進行同時檢測。

對于本發明所研究的兩種抗生素而言，因其具有熒光基團，在吸收光后能放射出熒光，所以使得熒光光譜法檢測喹諾酮抗生素成為可能。單諾沙星（DANO）與氟甲喹（FLU）都屬于喹諾酮類藥物，單諾沙星在激發波長(λex)/發射波長(λem)為280/440nm時出現最高熒光峰;氟甲喹的熒光出峰位置則在激發波長/發射波長為320/360nm。但是由于牛奶體系較為復雜，含有許多具有熒光性的物質，如蛋白質（λex/λem=290/320nm）、維生素A（λex/λem=321/410nm）、美拉德產物（λex/λem=360/410nm）和核黃素（λex/λem=360/410nm）等化合物，這些熒光物質會與所研究的抗生素的熒光信號發生光譜重疊，尤其是熒光強度高的蛋白質對分析物的熒光信號影響特別嚴重，所以去除蛋白是本文中必要的一步。再應用化學計量學的方法對熒光光譜圖進行處理解析之后，就可排除其它熒光組分的干擾（美拉德產物等），建立最佳校正模型和快速檢測方法。本文中共采用了兩種計量學方法：偏最小二乘法回歸（PLS2）和偏最小二乘法判別分析（PLS-DA）。偏最小二乘法主要是用于定量分析，對未知樣品中的某種組分含量進行預測，它在分解光譜矩陣時同時考慮了濃度矩陣的影響。偏最小二乘判別分析法主要是用于定性分析，判別單個未知樣品與已知樣品組之間的關系。

發明內容

針對上述情況，本發明的目的是提供一種利用熒光光譜并結合化學計量學的方法，建立快速且同時檢測牛乳中單諾沙星和氟甲喹殘留量的方法。

一種同時測定牛奶中單諾沙星與氟甲喹的熒光方法，包括以下步驟：