[發明專利]一種泡騰片式低分子量膠原蛋白肽及其制備方法

有效

• 申請號: 201210361765.9
• 申請日: 2012-09-24
• 公開（公告）號: CN102888436A
• 公開（公告）日: 2013-01-23
• 發明（設計）人: 朱宏吉;張華;王世鵬;滕欣余;路明月;姜珊;方潔;張鑫
• 申請（專利權）人: 天津大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K4/12;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/18;A61K8/97;A61K8/65;A61K8/02;A61Q19/00
• 代理公司: 天津市北洋有限責任專利代理事務所 12201
• 代理人: 王秀奎

技術領域

本發明涉及膠原蛋白肽提取及應用領域，更加具體地說，具體涉及一種泡騰片式低分子量膠原蛋白肽及其制備方法。

背景技術

膠原蛋白或稱膠原是由動物（從海綿動物到脊椎動物）細胞合成的一種生物高分子化合物，廣泛存在于動物骨、腱、軟骨和皮膚及其它結締組織中，約占哺乳動物總蛋白1/3，在骨頭與肌腱中約有90%以上，皮膚中約有50%以上的蛋白質為膠原蛋白。而膠原蛋白的水解產物膠原蛋白肽具有抗血壓、調節免疫、抗腫瘤、護膚美容等眾多功效。蛋白質水解產生的膠原蛋白活性肽主要是以化學法和酶法水解而來，化學法以酸或堿斷開蛋白質肽鍵，由于反應環境較極端，不利于活性的保持，而酶解蛋白質生產活性肽的安全性卻很高，能在溫和的條件下進行定位水解分裂產生特定的肽，且水解過程易控制，因而近幾年報道的活性肽的制備方法均為酶解法。酶的選擇是酶解法生產活性肽的關鍵，而目標活性肽的下游技術則是決定能否將之用于生產的關鍵。對于化妝品級膠原蛋白肽而言，《皮膠原蛋白的酶法提取及在高附加值領域的應用》、《化妝品級水解蛋白質分子量分布的研究》等相關文獻指出分子量低于2KD或1KD左右的膠原蛋白肽可以很好地滲入人體皮膚，達到美容護膚的作用。CN102199649A、CN102154424A、CN102031279A等相關專利以超濾、納濾設備為基礎截獲低分子量的膠原蛋白肽，但是從膠原蛋白肽的提取率上說，這種純化方法有一定的局限性，并且成本較高。目前市面上的膠原蛋白化妝品分子量分布較寬，1KD的膠原肽的比重不高，直接影響膠原化妝品的質量。并且絕大多數化妝品里都含有防腐劑，這增加了安全隱患。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的不足，提供一種低分子量膠原蛋白肽的提取方法以及相對應的泡騰片劑型和制備方法。不僅解決現有技術所存在的化妝品中含有人體難以吸收的高分子膠原蛋白的問題，也解決了工業生產中膠原蛋白肽分布范圍寬，得率低的問題；同時首創了不含有防腐劑的膠原化妝品新劑型。

本發明的技術目的通過下述技術方案予以實現：

一種低分子量膠原蛋白肽的提取方法，按照下述步驟進行：

步驟1，除去豬皮中非膠原性蛋白質

選取新鮮豬皮（即原料豬皮），清洗，瀝干，常溫20-25攝氏度的條件下，用0.1mol/l~0.15mol/lNaOH水溶液浸泡，料液比為1:25~1:30(g/ml，即豬皮的質量和NaOH水溶液的體積比)，在100-200轉/min下攪拌18h~24h，以除去豬皮里非膠原性蛋白質，然后過濾，得豬皮備用。

步驟2，脫除豬皮中的脂肪

按料液比為1:25~1:30(g/ml，即步驟1處理后的豬皮質量和水的體積比)的比例取水，然后加入占原料豬皮質量2%~4%的脂肪酶，調整溫度和體系的pH值以使加入的脂肪酶活性達到最大，在100-200轉/min的攪拌條件下脫除脂肪。例如使用脂肪酶（天津市諾奧科技發展有限公司，型號IF-G-NL2）時，使用Na₂CO₃粉末調節pH值為9～9.3，35℃恒溫低速100-200轉/min攪拌8h~10h。

步驟3，溶膠

將脫去脂肪的豬皮置于水中，料液比1:15~1:20(g/ml，即步驟2處理后的豬皮質量和水的體積比),80℃的條件下恒溫加熱，低速100-200轉/min攪拌4h~6h，得到豬皮和水溶性膠原的混合物。

步驟4，制備胰蛋白酶酶解蛋白肽溶液

將上一步的豬皮和水溶性膠原的混合物降溫，同時調節混合物溶液的pH值以使加入的胰蛋白酶活性達到最大，加入胰蛋白酶，E/[S]=1000~2500u/g（即每g原料豬皮對應的胰蛋白酶活性為1000-2500u）,低速100-200轉/min攪拌18h-24h。然后將酶解后的蛋白肽液滅酶活，離心除去不溶物，得到胰蛋白酶酶解蛋白肽液。利用使用胰蛋白酶（天津市諾奧科技發展有限公司，型號YDB-G-035）時，將上一步的豬皮和水溶性膠原的混合物降溫至50℃,保持50℃恒溫。調節混合物溶液的pH=7，加入胰蛋白酶，將酶解后的蛋白肽液置于95℃的環境下5-10min，以滅酶活。

步驟5，蛋白肽液脫色

配置2wt%~4wt%的硅藻土的水溶液，抽濾，使濾紙表面形成一層均勻的硅藻土層，以此為過濾介質，對蛋白肽液抽濾。抽濾后的蛋白肽液進入樹脂柱進行分離，得到澄清透明的膠原蛋白肽液。在使用D296R樹脂（南開大學化工廠，全稱為大孔強堿性苯乙烯系陰離子交換樹脂）時，可控制流速為以2ml/min~6ml/min的流速進入D296R型樹脂柱。