[發明專利]一種采用高效液相色譜檢測磷霉素鈉中有關物質的方法

有效

• 申請號: 201210361344.6
• 申請日: 2012-09-25
• 公開（公告）號: CN102841155A
• 公開（公告）日: 2012-12-26
• 發明（設計）人: 馮文宇;崔瑩;周巖;吳濤;謝丹;尤楠;唐奎山;尹宏;婁玉濤;周秀峰;孟濤;劉志清
• 申請（專利權）人: 東北制藥集團股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 沈陽維特專利商標事務所(普通合伙) 21229
• 代理人: 甄玉荃

技術領域

本發明涉及化合物物質檢測領域中的一種采用高效液相色譜檢測磷霉素鈉中有關物質的方法。

背景技術

磷霉素(Fosfomycin)系1967年由美國默克公司和西班牙CEPA公司從西班牙土壤中的鏈絲菌中發現的一種廣譜抗生素，其分子量很小，是一個不同于其他任何一種抗生素結構的全新抗生素。目前磷霉素已經在中國、歐洲和日本等國家和地區廣泛應用，其應用于臨床的品種主要有3個，分別是磷霉素鈉、磷霉素鈣和磷霉素氨丁三醇，其中，中國應用較廣泛的品種為磷霉素鈉。磷霉素鈉抗菌譜廣、不良反應小，易進入感染組織內，是治療輕、中度感染的一線用藥之一，是治療重度感染、耐藥菌感染聯合使用的理想藥物。安全、低毒、無需試敏的特點給臨床應用帶來便利，與其他抗生素相比有獨特的優點。但是，目前磷霉素鈉的法定檢測方法中均未收載其有關物質的檢測方法，為保證藥品的質量及其安全性，亟需建立檢測方法對其進行控制。因此，研制開發一種采用高效液相色譜檢測磷霉素鈉中有關物質的方法一直是亟待解決的新課題。

發明內容

本發明的目的在于提供一種重現性好、靈敏度高、檢測精確、專屬性強、操作方法簡便、檢測設備和儀器應用廣泛的采用高效液相色譜檢測磷霉素鈉中有關物質的方法。

本發明的目的是這樣實現的：一種采用高效液相色譜檢測磷霉素鈉中有關物質的方法，所述方法包括如下步驟：

（1）色譜條件

色譜柱為氨基-丙基硅烷鍵合的硅膠柱，檢測器為示差折光檢測器，流動相為正磷酸鹽水溶液；

（2）對照品溶液的制備

取磷霉素鈉標準品用流動相配制成磷霉素鈉的對照品溶液；

（3）參照溶液一的制備

（a）用水濕潤的磷霉素鈉原料，在烘箱中進行加熱，得到磷霉素鈉殘渣，殘渣中含雜質A，用適量流動相溶解所述殘渣，得到殘渣溶液；（b）取磷霉素鈉原料溶于適量所述殘渣溶液中得到參照溶液一；

（4）供試品溶液的制備

取磷霉素鈉原料用流動相配制成供試品溶液；

（5）參照溶液二的制備

將供試品溶液用流動相進行稀釋，得到參照溶液二；

（6）測定方法

取參照溶液一注入高效液相色譜儀，記錄譜圖，計算磷霉素峰與雜質A峰的分離度應大于或等于1.5；取對照品溶液，平行進樣，注入高效液相色譜儀，記錄譜圖，計算磷霉素峰面積的相對標準偏差應小于或等于0.85%；取供試品溶液、參照溶液二分別注入高效液相色譜儀，記錄譜圖，計算供試品溶液中雜質的峰面積；

在步驟（1）中，所述的氨基-丙基硅烷鍵合的硅膠柱為Zorbax-NH2柱；所述檢測器的溫度為30-40℃，優選溫度為35℃；所述正磷酸鹽選自磷酸氫二鈉、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鈉、磷酸二氫鉀中的一種或幾種，優選磷酸二氫鉀；所述正磷酸鹽水溶液的濃度為0.05-0.12mol/l，優選0.08mol/l；在步驟（2）中，所述對照品溶液中磷霉素鈉的濃度為0.06-0.24g/ml，優選0.12g/ml；在步驟（3）中的步驟（a）中，所述烘箱加熱的溫度為50-70℃，優選溫度60℃；所述加熱的時間為16-30小時，優選時間為24小時；所述殘渣溶液為每100ml含有將1-2g所述磷霉素鈉原料加熱所得殘渣的殘渣溶液，優選每100ml含有將1.5g所述磷霉素鈉原料加熱所得殘渣的殘渣溶液；在步驟（3）中的步驟（b）中，所述參照溶液一為每10ml含有溶于所述殘渣溶液中的磷霉素鈉原料0.6-2.4g，優選每10ml含有溶于所述殘渣溶液中的磷霉素鈉原料1.2g；在步驟（4）中，所述供試品溶液中磷霉素鈉的濃度為0.06-0.24g/ml，優選磷霉素鈉的濃度為0.12g/ml；在步驟（5）中，每200ml所述參照溶液二含有0.5-1.5ml所述供試品溶液，優選每200ml所述參照溶液二含有1ml所述供試品溶液；在步驟（6）中，所述參照溶液一、對照品溶液、供試品溶液、參照溶液二的進樣體積為3-20μl，優選進樣體積為10μl；所述雜質為雜質A、非特定雜質及總雜質；所述的正磷酸鹽水溶液的配制方法為將適量所述正磷酸鹽置于水中溶解，過濾，超聲；所述的雜質A為（1,2-二羥基丙基）膦酸。

本發明的要點在于采用高效液相色譜檢測磷霉素鈉中有關物質的方法。其原理是：利用磷霉素鈉與雜質結構特點的不同，通過高效液相色譜法，采用氨基-丙基硅烷鍵合的硅膠柱作為色譜柱，正磷酸鹽水溶液作為流動相，使得磷霉素鈉和雜質得到良好的分離，再通過示差折光檢測器進行檢測，并進行計算從而得到磷霉素鈉原料中有關物質的含量。