[發明專利]一種牛CSRP3基因單堿基突變的檢測方法

無效

• 申請號: 201210361163.3
• 申請日: 2012-09-22
• 公開（公告）號: CN103305599A
• 公開（公告）日: 2013-09-18
• 發明（設計）人: 劉小林;賀花;張慧林;楊菁;李志雄;牛富彪
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種牛CSRP3基因單堿基突變的檢測方法，其特征在于，以包含CSRP3基因的待測秦川肉牛和中國荷斯坦奶牛全基因組DNA序列為模板，設計CSRP3基因特異性引物，在PCR反應程序下進行擴增，擴增后的特異性PCR產物經檢測出現目的帶時，直接用限制性內切酶HhaI消化PCR產物，然后再進行瓊脂糖凝膠電泳，電泳結果發現3種不同條帶，分別對應著3種不同基因型，挑取不同帶型送測序驗證，利用生物信息學方法，將測序結果與NCBI公布的序列進行比較，發現該CSRP3基因第2外顯子區域即第14832位發生了A＞T突變；

??所述的牛CSRP3基因特異性引物為：

上游引物CSRP3-GSP-F：??5'-?CACAGGTCAGGAATCAAAG?-3'??19bp；

下游引物CSRP3-GSP-R：??5'-?GCAAAGGTCAAACAATAGG?-3'??19bp；

所述的PCR?反應體系為：

總反應體系為15?μL，其中包括2×Reaction?Mix?7.5?μL，ddH₂O?6.1?μL，上游引物CSRP3-GSP-F?0.3?μL，下游引物CSRP3-GSP-R?0.3?μL，Golden?DNA?polymerase?0.3?μL，含CSRP3基因序列的DNA模板0.5?μL；

所述的PCR反應程序為：

95℃預變性5?min，94℃變性30?s，60℃退火40?s，72℃延伸40?s，共36個循環，72℃充分延伸10?min，最后16℃保存待用。

2.根據權利要求1所述的檢測牛CSRP3基因單堿基突變的PCR-RFLP方法，其特征在于，所述的瓊脂糖凝膠濃度為3%。