[發(fā)明專利]GDSL蛋白在制備脂肪酶中的新用途

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210356229.X
• 申請日: 2012-09-21
• 公開（公告）號: CN102876643A
• 公開（公告）日: 2013-01-16
• 發(fā)明（設計）人: 周志剛;何夙旭;徐俐;楊雅麟;張美超;李青
• 申請（專利權）人: 中國農業(yè)科學院飼料研究所
• 主分類號: C12N9/20
• 分類號: C12N9/20;C12N1/21;C12N15/55;C12P7/22;C12P7/40;C12P7/54;C12P7/52;C12P7/64;C12R1/19
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.GDSL蛋白的應用，為如下（1）或（2）：

（1）制備脂肪酶；（2）降解脂肪酶的底物；

所述GDSL蛋白是如下（a）或（b）：（a）由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質；（b）將序列表的序列2所示氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有脂肪酶活性的由序列2衍生的蛋白質。

2.如權利要求1所述的應用，其特征在于：所述（2）中，所述降解的反應條件為30-80℃、pH6.5-8.0。

3.如權利要求1或2所述的應用，其特征在于：所述（2）中，所述脂肪酶的底物為對硝基苯基乙酸酯、丁酸對硝基苯酯、4-硝基苯基辛酸酯、4-硝基苯基葵酸酯、4-硝基苯基月桂酸酯和4-硝基苯基棕櫚酸酯中的至少一種。

4.如權利要求1至3中任一所述的應用，其特征在于：所述GDSL蛋白為權利要求7所述方法制備得到的蛋白質。

5.將重組質粒導入大腸桿菌得到的重組菌；所述重組質粒為將GDSL蛋白的編碼基因插入載體pET-28a(+)的多克隆位點得到的重組質粒；

所述GDSL蛋白是如下（a）或（b）：（a）由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質；（b）將序列表的序列2所示氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有脂肪酶活性的由序列2衍生的蛋白質。

6.如權利要求5所述的重組菌，其特征在于：所述GDSL蛋白的編碼基因是如下1）至4）中任一所述的DNA分子：1）序列表的序列3自5’末端第1至792位核苷酸所示的DNA分子；2）序列表的序列3所示的DNA分子；3）在嚴格條件下與1）或2）限定的DNA序列雜交且編碼具有脂肪酶活性的蛋白的DNA分子；4）與1）或2）限定的DNA序列具有90%以上同源性且編碼具有脂肪酶活性的蛋白的DNA分子。

7.一種制備GDSL蛋白的方法，是培養(yǎng)權利要求5或6所述的重組菌，得到GDSL蛋白；所述GDSL蛋白是如下（a）或（b）：（a）由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質；（b）將序列表的序列2所示氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有脂肪酶活性的由序列2衍生的蛋白質。

8.一種降解脂肪酶的底物的方法，是采用GDSL蛋白降解脂肪酶的底物；

所述GDSL蛋白是如下（a）或（b）：（a）由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質；（b）將序列表的序列2所示氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有脂肪酶活性的由序列2衍生的蛋白質。

9.如權利要求8所述的方法，其特征在于：所述降解的反應條件為30-80℃、pH6.5-8.0；所述脂肪酶的底物為對硝基苯基乙酸酯、丁酸對硝基苯酯、4-硝基苯基辛酸酯、4-硝基苯基葵酸酯、4-硝基苯基月桂酸酯和4-硝基苯基棕櫚酸酯中的至少一種。

10.如權利要求8或9所述的方法，其特征在于：所述GDSL蛋白為權利要求7所述方法制備得到的蛋白質。