[發明專利]一種快速診斷胰腺創傷和急性胰腺炎的測試卡及其制備方法

有效

• 申請號: 201210355770.9
• 申請日: 2012-09-21
• 公開（公告）號: CN102879583A
• 公開（公告）日: 2013-01-16
• 發明（設計）人: 田伏洲;任建東
• 申請（專利權）人: 田伏洲;任建東
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理事務所(普通合伙) 11369
• 代理人: 史霞

1.一種快速診斷胰腺創傷和急性胰腺炎的測試卡，其特征在于，包括：

塑料外殼，所述塑料外殼上部設置有加樣孔和觀察窗，其中所述加樣孔的數量為至少三個，所述多個加樣孔沿所述塑料外殼寬度的方向等距離分布在所述塑料外殼的一端，所述加樣孔和所述觀察窗上固定有一層透明的防水薄膜；

底襯，所述底襯以粘接的方式固定于所述塑料外殼內底部；

檢測模塊，所述檢測模塊包括層析膜、結合墊、樣品墊、過濾墊和吸水墊，所述結合墊、樣品墊和過濾墊從下至上依次粘接在所述層析膜上面對應于所述加樣孔的一端，其中所述過濾墊位于所述檢測模塊的最上層，并對應于所述加樣孔的位置，所述吸水墊設置于所述層析膜上面的另一端，所述層析膜上設置有測試線和質控線，所述測試線為包被的TAP多克隆抗體，所述質控線為包被的兔抗小鼠免疫球蛋白抗體，所述層析膜與底襯粘接在一起。

2.如權利要求1所述的快速診斷胰腺創傷和急性胰腺炎的測試卡，其特征在于，所述底襯上設置有多個縱向平行排列的凹槽；所述檢測模塊為多個，其數量與所述底襯的凹槽數量一致，并分別粘貼于所述底襯的各個凹槽內，彼此之間由所述凹槽的側壁隔開，所述加樣孔對應于所述凹槽內檢測模塊上部的位置。

3.如權利要求2所述的快速診斷胰腺創傷和急性胰腺炎的測試卡，其特征在于，所述結合墊、樣品墊和過濾墊的長度小于所述層析膜的長度，對應于所述塑料外殼上部加樣孔的位置，且其邊緣不超過所述觀察窗的左側邊緣；所述吸水墊的長度小于所述層析膜的長度，且其邊緣不超過所述觀察窗的右側邊緣。

4.如權利要求3所述的快速診斷胰腺創傷和急性胰腺炎的測試卡，其特征在于，所述檢測模塊中的過濾墊為微孔濾膜，濾膜孔徑為0.2-0.45μ。

5.如權利要求4所述的快速診斷胰腺創傷和急性胰腺炎的測試卡，其特征在于，所述吸水墊由至少一層濾紙包被干燥劑而成，呈長方體，其底面與所述層析膜接觸。

6.如權利要求5所述的快速診斷胰腺創傷和急性胰腺炎的測試卡，其特征在于，所述測試線與質控線設置于層析膜上對應于所述觀察窗的位置，其中所述測試線數量為三條，每條測試線之間的距離為3-6mm，按照從左到右的順序三條測試線的TAP多克隆抗體的濃度分別為1-10nmol/L、10-50nmol/L和50-100nmol/L；所述質控線數量為一條，位于所述測試線右側的位置，所述質控線與最右側測試線之間的距離為3-8mm。

7.如權利要求2或6所述的快速診斷胰腺創傷和急性胰腺炎的測試卡的制備方法，其中所述TAP多克隆抗體測試線的制備過程如下

步驟一、合成人源TAP，并以合成的人源TAP作為抗原；

步驟二、制備膠體金溶膠；

步驟三、制備TAP單克隆抗體：

a、采用常規的戊二醛交聯法，將人源TAP分別與血藍蛋白和血清蛋白交聯制成TAP-KLL偶聯物和TAP-BSA偶聯物；

b、用TAP-KLH偶聯物免疫Balb/c小鼠；

c、取免疫小鼠脾細胞和商品SP2/0骨髓瘤細胞在聚乙二醇PEG-4000作用下，按照常規方法進行細胞融合，生成雜交瘤細胞株懸液；

d、采用間接酶聯免疫吸附法篩選抗TAP的雜交瘤細胞株；

e、將雜交瘤細胞株接種于用福氏不完全佐劑預處理1周后的Balb/c小鼠腹腔內，收集腹水按照單克隆抗體亞類的不同采用辛酸法或硫酸銨法或聚乙二醇PEG沉淀法純化腹水即收獲TAP單克隆抗體。

步驟四、將TAP單克隆抗體用磷酸鹽緩沖液溶解作為母液加入膠體金溶膠，去上清液后用磷酸鹽緩沖液復溶即制成膠體金標記的TAP單克隆抗體；

步驟五、將磷酸鹽緩沖液制備溶液復溶，復溶后與福氏完全佐劑混合，然后將此混合物在家兔的不同部位進行皮下注射，重復多次后收集家兔血液，去除血凝塊后通過離心機收集含多克隆抗體的抗血清，將抗血清純化后得到TAP多克隆抗體溶液；

步驟六、將TAP多克隆抗體溶液制成不同濃度后包被在層析膜上即成測試線。

8.如權利要求2或6所述的快速診斷胰腺創傷和急性胰腺炎的測試卡的制備方法，其中所述兔抗小鼠免疫球蛋白抗體質控線的制備過程如下：

步驟一、將Balb/c小鼠的免疫球蛋白作為抗原，對家兔不同部位進行皮下注射，重復多次后收集家兔血液；

步驟二、通過離心機離心收集兔血中的抗血清；

步驟三、將收集到的抗血清進行純化；

步驟四、將純化后所得到的溶液包被在層析膜上，即成質控線。