[發明專利]檢測IL28B(rs8099917)和ITPA(rs1127354)的突變的方法

無效

• 申請號: 201210353290.9
• 申請日: 2012-09-14
• 公開（公告）號: CN102994629A
• 公開（公告）日: 2013-03-27
• 發明（設計）人: 黑瀨薰;細見敏也
• 申請（專利權）人: 愛科來株式會社
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京東方億思知識產權代理有限責任公司 11258
• 代理人: 肖善強

技術領域

本發明涉及檢測IL28B(rs8099917)和ITPA(rs1127354)的突變方法以及用于該目的的核酸探針和試劑盒。

背景技術

丙型肝炎是通過感染丙型肝炎病毒(HCV)而導致發病的一種病毒性肝炎。日本國HCV患者數達到約200萬人，HCV患者中6～8成轉變為慢性肝炎。不對其進行治療的話，慢性肝炎的狀態經過10～30年，3～4成轉變為肝硬化/肝癌。干擾素療法作為排除HCV的抗病毒療法，通過與利巴韋林(リバビリン)的聯用/干擾素的PEG化，改善了治療成績。

報道稱，針對PEG干擾素+利巴韋林的聯用療法有效的日本人患者和無效患者314人，分析了人基因中有個體差異的大約90萬處，結果，作為干擾素(IFN)的一種的IL28B基因及其基因周圍存在的SNP與治療效果有關聯(Nature?Genetics?41，1105-1109(2009))。此外，報道稱，預測與PEG干擾素+利巴韋林聯用療法的效果相關的6個SNP內，rs8099917是對治療效果最有影響的(PLoS?One.2010Oct?29；5(10)：e13771.)。

利巴韋林誘發性貧血是抗丙型肝炎病毒(HCV)療法治療中斷及減量的主要原因之一(Hepatol?Res.2010Nov；40(11)：1063-1071.)。報道稱，以接受PEG干擾素(PEG-IFN)/利巴韋林聯用療法的日本人丙型肝炎患者為對象，評價了ITPA基因突變帶來的臨床意義，結果發現，rs1127354(其是ITPA外顯子內功能性SNP)是利巴韋林誘發性貧血的有用的預測因子(Gastroenterology.2010Oct；139(4)：1190-7.Epub?2010Jul?14.)。

PLoS?One.2010Oct?29；5(10)：e13771.中報道：IL28B(rs8099917)的突變與對丙型肝炎患者的PEG干擾素+利巴韋林療法強烈相關，是否有IL28B(rs8099917)的突變使用測序分析來檢測。HePATOLOGY，Vol.53，Issue?2，P.415-421，2011中報道，ITPA(rs1127354)的突變與使用PEG干擾素/利巴韋林療法時的貧血強烈相關，ITPA(rs1127354)的突變使用測序分析來檢測。

但是，如PLoS?One.2010Oct?29；5(10)：e13771.和HePATOLOGY，Vol.53，Issue?2，P.415-421，2011所述，為調查丙型肝炎患者的SNP突變而進行的從全血提取基因組，在實際的臨床現場非常需要人力和成本。因此預計很需要從全血直接自動測定是否有突變的技術。此外，因為使用PEG干擾素+利巴韋林療法時，IL28B(rs8099917)和ITPA(rs1127354)與效果相關，臨床領域非常可能很需要同時測定IL28B(rs8099917)和ITPA(rs1127354)是否有突變的技術。但PLoS?One.2010Oct?29；5(10)：e13771.和HePATOLOGY，Vol.53，Issue?2，P.415-421，2011由于是進行測序分析，來發現IL28B(rs8099917)和ITPA(rs1127354)有無突變，因此無法同時檢測兩種突變的有無。

特開2002-119291號公報中記載了使用經熒光染料標記的核酸探針、使其與靶標核酸雜交、測定熒光染料發光的減少量的方法。但是，使用經熒光染料標記的核酸探針、使其與靶標核酸雜交、測定熒光染料發光的減少量的過程實施時，并不能對任何任意序列均可實施，必須針對每種突變找到適當的序列。

發明內容

發明要解決的問題

本發明以提供下述方法及用于其的試劑盒作為要解決的問題，所述方法用于指定能有效檢測IL28B基因多態性的rs8099917和ITPA基因多態性的rs1127354的探針、檢測IL28B基因多態性的rs8099917和ITPA基因多態性的rs1127354。

用于解決問題的手段

本發明的發明人發現，通過基于包含IL28B基因多態性的rs8099917的特定區域以及包含ITPA基因多態性的rs1127354的特定區域來設計探針，使用該探針，來通過檢測基于與靶標核酸形成雜交體和/或雜交體解離的信號，可檢測所述的突變，從而實現本發明。

即，本發明如下所述。

(1)一種多態性檢測用探針，其是用于檢測IL28B基因的多態性的探針，其特征在于包含下述P1或P1’的熒光標記寡核苷酸，