[發明專利]11-氧乙酰鳥巢烷三醇和15-氧乙酰鳥巢烷三醇的生產方法及其專用菌株

有效

• 申請號: 201210352773.7
• 申請日: 2012-09-20
• 公開（公告）號: CN102851218A
• 公開（公告）日: 2013-01-02
• 發明（設計）人: 劉宏偉;韓俊杰;陳玉惠;寶麗
• 申請（專利權）人: 中國科學院微生物研究所
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P15/00;C12R1/645
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;王慧鳳

1.非洲黑蛋巢（Cyathus?africanus）L38，其在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心的保藏編號為CGMCC?NO.6259。

2.非洲黑蛋巢（Cyathus?africanus）L38?CGMCC?NO.6259在制備式II所示化合物和/或式III所示化合物中的應用；

(式Ⅱ）????????????????????????(式Ⅲ）

3.一種制備式II所示化合物和式III所示化合物的方法，包括以下步驟：

1）將發酵非洲黑蛋巢（Cyathus?africanus）L38?CGMCC?NO.6259接種到固體培養基上進行固體發酵培養；

2）在步驟1）發酵后的體系中加入有機溶劑浸泡提取得到含有式II所示化合物和式III所示化合物的提取液，將所述提取液減壓蒸餾，得到含有式II所示化合物和式III所示化合物的粗提物；

其中，步驟1）中，所述固體培養基由基材和水混合得到，所述基材選自小麥、粳米、玉米、糯米、芡實、秈米和薏米中的一種或兩種以上任意組合；所述固體培養基的含水量是所述的基材總重量的100-150%。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：所述步驟1）中，所述固體發酵培養的培養條件是18-28℃，避光靜止培養20-60天。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于：所述步驟1）中，所述固體發酵培養的培養條件是25℃，避光靜止培養30天。

6.根據權利要求4或5所述的方法，其特征在于：所述步驟2）中，所述有機溶劑是乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇、氯仿、異丙醇和正丁醇中的任意一種。

7.根據權利要求3-6中任意一項所述的方法，其特征在于：所述方法中，還包括將步驟2獲得的粗提物用硅膠柱層析分離，以氯仿和丙酮的混合液為溶劑，按照溶劑中氯仿和丙酮的比例依次是100:0、100:1、50:1、30:1、20:1、10:1、5:1、3:1、2:1的洗脫梯度進行梯度洗脫，每個梯度洗脫溶劑1500毫升，每350毫升收集為一個流份；將氯仿和丙酮的比例為10:1的洗脫溶劑洗脫的第二個流份減壓濃縮干燥后溶解于10毫升甲醇溶液中，室溫靜置，析出無色結晶，得到式Ⅱ所示的化合物；將氯仿和丙酮的比例為10:1的洗脫溶劑洗脫的第三個流份減壓濃縮干燥后溶解于10毫升甲醇溶液中，室溫靜置過夜，析出無色結晶，得到式Ⅲ所示的化合物。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于：所述步驟1）中，還包括在固體發酵之前將非洲黑蛋巢（Cyathus?africanus）L38?CGMCC?NO.6259在PDA固體培養基上進行預培養，取預培養后的菌絲體轉接到液體培養基中進行培養；預培養的條件為：25-28℃，避光培養5-7天；液體培養的條件為：25-28℃，避光培養7-10天；

所述PDA培養基的組成為：土豆200g，葡萄糖20g，瓊脂粉16g，水定容至1L；所述液體培養基的組成為：葡萄糖4.0g/L，麥芽提取物10.0g/L，酵母4.0g/L，水定容至1L。