[發(fā)明專利]流腦多糖-蛋白質綴合疫苗及制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210351607.5
• 申請日: 2012-09-19
• 公開（公告）號: CN102861326A
• 公開（公告）日: 2013-01-09
• 發(fā)明（設計）人: 朱濤;宇學峰;劉正;邵忠琦;毛慧華;邱東旭
• 申請（專利權）人: 天津康希諾生物技術有限公司
• 主分類號: A61K39/095
• 分類號: A61K39/095;A61K39/385;A61K47/48;A61P31/04
• 代理公司: 天津市北洋有限責任專利代理事務所 12201
• 代理人: 陸藝

技術領域

本發(fā)明屬于生物技術領域，特別是涉及一種流腦多糖-蛋白質綴合疫苗及制備方法。?

背景技術

奈瑟氏腦膜炎球菌（Neisserza?meningitides）是全球細菌性腦膜炎的主要原因。在最近的30年中，地方性腦膜炎球菌疾病的發(fā)病率在發(fā)展中國家為每100，000人中10到25人（Reido，F.X.等人，1995）。病例致死率在10到20%之間。?

病原腦膜炎球菌被多糖莢膜所包被，附著在生物體外膜表面?；谇v膜多糖的免疫學特異性，已經鑒定出13種不同的腦膜炎球菌血清型。這13個血清型中的5個引起了大部分腦膜炎球菌疾??；它們包括血清型A、B、C、W-135和Y。血清型A引超大部分流行性疾病。血清型B、C和Y引起大多數地方性疾病和疾病的區(qū)域性爆發(fā)。?

人類是唯一已知的腦膜炎奈瑟氏球菌的天然攜帶者。腦膜炎球菌可被持續(xù)攜帶幾個月，腦膜炎球菌通過直接接觸或通過空氣飛沫傳播。對入侵的腦膜炎球菌的宿主防御依賴于補體介導的溶菌作用，而在其中發(fā)揮作用的血清抗體大部分是針對莢膜多糖的。?

基于腦膜炎球菌多糖的疫苗已經被描述，其引起針對莢膜多糖的免疫應答。這些抗體可以對血清型特異性腦膜炎球菌引起補體介導的溶菌作用。腦膜炎球菌多糖疫苗顯示對兒童和成人有效，但對于嬰兒和幼兒其效能有限。對年幼群體，此多糖的后繼給藥產生弱加強應答或無加強應答。腦膜炎球菌多糖疫苗的保護期不能持續(xù)很長，并且據估計對成人和大于4歲的兒童而言為3到5年。對1至4歲的兒童而言保護期少于3年。?

多糖能與主要組織相容性復合體分子結合，而這是抗原呈遞和刺激T-輔助淋巴細胞的前提條件，也即它們是非T。細胞依賴性抗原。多糖能夠不需T-輔助淋巴細胞的輔助而刺激B淋巴細胞產生抗體。由于對B淋巴細胞的非T-細胞依賴性刺激，這些抗原免疫后缺乏記憶誘導。在成人體內，多糖抗原可以產生非常有效的非T-細胞依賴性應答，但在嬰兒和幼兒的不成熟免疫系統(tǒng)中這些非T-細胞依賴性應答卻很弱。?

非T-細胞依賴性多糖抗原可以通過將多糖共價連接至蛋白質分子（“載體”或“載體蛋白質”）上而轉變?yōu)門-細胞依賴性抗原。與綴合疫苗的多糖組分結合的B細胞可以被肽特異的T輔助細胞激活，所述肽為綴合的載體蛋白質的一部分。對載體蛋白質的T-輔助細胞應答可以增加針對多糖的抗體的產生。?

目前國外已經上市的流腦結合疫苗中，W-135型及Y型流腦多糖均在片段化后采用連接接頭與載體蛋白進行連接（如：中國專利CN100556459C描述的以TT為載體和W性或Y型寡糖結合的疫苗，中國專利CN1889975A描述的以CRM197為載體和W型或Y型寡糖結合的疫苗）。由于載體蛋白和天然多糖并沒有活性基團可以反應，連接接頭上是一種有機分子，?一端具有和蛋白反應的化學活性，另一端具體和多糖連接的化學活性。已經被采用的接頭有：己二酸二酰肼，1,4-丁二胺，N-乙酰高半胱氨酸硫內酯等,有些接頭和蛋白或多糖連接反應之前，必須對蛋白和多糖進行衍生。這些接頭一般是惰性的，也就是不會與人體蛋白質或其他大分子在生理條件下產生化學反應，而且在結合疫苗的制備工藝中也會被盡量的去除，但是這些接頭存在于結合產物中，可引起人體免疫系統(tǒng)來針對這些接頭產生免疫反應，會產生相應的無效抗體。目前用于流腦多糖結合疫苗不但采用接頭的工藝，而且需要對多糖進行解聚以降低其分子量，但是在這個過程中，多糖會有損失，從而增加了產品的總體生產成本。?

中國專利CN1889975A描述的以CRM197為載體和W型或Y型寡糖結合的疫苗的分子量一般在200KD以下。一般認為大分子量的免疫原會產生更強的免疫反應。因此有必要開發(fā)出分子量較大的免疫綴合物。?

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的是克服現有技術的不足，提供一種流腦多糖-蛋白質綴合疫苗。?

本發(fā)明的第二個目的是提供一種流腦多糖-蛋白質綴合疫苗的制備方法。?

本發(fā)明的第三個目的是提供一種多價流腦多糖-蛋白質綴合疫苗。?

本發(fā)明的技術方案概述如下：?

流腦多糖-蛋白質綴合疫苗，其特征是用[S-C]n-[N-P]m表示，其中S表示一種流腦多糖分子，C表示該流腦多糖分子中引入醛基的C原子，P表示CRM197蛋白分子，N表示該蛋白分子中賴氨酸側鏈氨基的N原子；n和m大于1且小于10；所述S的分子量>100KD；所述[S-C]n-[N-P]m的平均分子量在200KD到2000KD之間，所述流腦多糖為W-135型和Y型流腦多糖中的至少一種，所述流腦多糖為奈瑟氏腦膜炎球菌莢膜多糖的簡稱。?