[發明專利]一株產葡萄糖氧化酶的基因工程菌及其構建與應用

有效

• 申請號: 201210349289.9
• 申請日: 2012-09-19
• 公開（公告）號: CN102994406A
• 公開（公告）日: 2013-03-27
• 發明（設計）人: 陳堅;顧磊;張娟;堵國成;沈依娜;李夢潔;李婷;王丹;丁雪;殷政
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N1/19
• 分類號: C12N1/19;C12N15/81;C12N9/04;C12R1/84;C12R1/685
• 代理公司: 北京匯信合知識產權代理有限公司 11335
• 代理人: 王秀麗

1.一株產葡萄糖氧化酶的基因工程菌，于2012年7月1日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號CCTCC?NO：M?2012266。

2.權利要求1所述基因工程菌，其特征在于可誘導表達外源葡萄糖氧化酶。

3.一種權利要求1所述基因工程菌的構建方法，包括如下步驟：

1）根據本實驗室篩選保藏的黑曲霉CCTCC?NO：M2011291的基因為模版設計引物，獲得GOD基因；

2）將葡萄糖氧化酶基因連接到畢赤酵母表達載體pPIC9K，得到重組質粒pPIC9K-GOD；

3）重組載體轉化Pichia?pastoris?GS115得到基因工程菌CCTCC?NO：M?2012266。

4.權利要求1所述菌株生產葡萄糖氧化酶的方法，其特征在于：以權利要求1所述酵母工程菌為生產菌株，活化后，將30℃、200rpm下培養到OD₆₀₀在1.6-1.7之間的種子以2%的接種量轉入基本發酵培養基，于30℃、200rpm條件下培養；當OD值為1.2-1.5時，將酵母細胞轉入BMMY培養基中誘導蛋白的產生；

種子培養基采用YPD培養基；；基本發酵培養基采用BMGY培養基；誘導培養基為BMMY培養基中添加0.8%的甲醇。