[發(fā)明專利]SNP檢測篩選雞的絲羽性狀的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210348358.4
• 申請日: 2012-09-18
• 公開（公告）號: CN103667429A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 胡曉湘;馮春剛;宋遲;顧曉榮;王彥強;李寧
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;A01K67/02
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛;張慶敏

1.SNP檢測篩選雞的絲羽性狀的方法，其特征在于，包括如下步驟：

1）提取待測雞DNA樣品，用DNA特異性引物對進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

2）對PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中的雞第3號染色體70486623bp位點進(jìn)行單核苷酸多態(tài)性檢測。

2.如權(quán)利要求1所述的SNP檢測篩選雞的絲羽性狀的方法，其特征在于，步驟1）所述的DNA特異性引物對的脫氧核糖核苷酸序列為：

上游引物：5’-Biotin-CGACTCTCAACGCGGGAAC-3’

下游引物：5’-CTGGGGGCAGCCATCTTG-3’

3.如權(quán)利要求1所述的SNP檢測篩選雞的絲羽性狀的方法，其特征在于，步驟1）所述的PCR擴(kuò)增，其25μl反應(yīng)體系終濃度為：

4.如權(quán)利要求1所述的SNP檢測篩選雞的絲羽性狀的方法，其特征在于，步驟1）所述的PCR擴(kuò)增的反應(yīng)條件為：94℃變性5min；94℃變性30sec，63℃退火30sec，65℃延伸1min，其中每擴(kuò)增1個循環(huán)退火溫度降低1℃，共10循環(huán)；94℃變性30sec，53℃退火30sec，65℃延伸1min，共30循環(huán)；65℃延伸7min；20℃保存；取2μl用于瓊脂糖檢測，擴(kuò)增得到單一的目的條帶后用于進(jìn)一步檢測。

5.如權(quán)利要求1所述的SNP檢測篩選雞的絲羽性狀的方法，其特征在于，步驟2）所述的單核苷酸多態(tài)性檢測采用焦磷酸鹽測序方法，為在PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中加入測序引物，放入PyroMarkID焦磷酸測序儀進(jìn)行SNP檢測。

6.如權(quán)利要求5所述的SNP檢測篩選雞的絲羽性狀的方法，其特征在于，所述的測序引物的脫氧核糖核苷酸序列為：

5’-GCGTCGCACACGGGC-3’

7.如權(quán)利要求5所述的SNP檢測篩選雞的絲羽性狀的方法，其特征在于，所述的焦磷酸鹽測序方法具體為：

在步驟2）PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中加入Binding?Buffer?38μl、Sepharoe?Beads?2μl和滅菌水20μl，充分混勻10分鐘，轉(zhuǎn)移到反應(yīng)板中，加入Annealing?Buffer12μl，10μM測序引物1μl，放入PyroMarkID焦磷酸測序儀進(jìn)行SNP檢測，讀取結(jié)果。

8.用于權(quán)利要求1所述的SNP檢測篩選雞的絲羽性狀的方法的試劑盒，包含脫氧核糖核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1和SEQ?ID?NO.2所示的引物。

9.權(quán)利要求1-7任一項所述的SNP檢測篩選雞的絲羽性狀的方法在雞的育種中的應(yīng)用。

10.權(quán)利要求9所述的SNP檢測篩選雞的絲羽性狀的方法在雞的育種中的應(yīng)用，為在雞分子標(biāo)記輔助選擇中的應(yīng)用。