[發明專利]一種激活促紅細胞生成素基因表達的方法

在審

• 申請號: 201210348223.8
• 申請日: 2012-09-18
• 公開（公告）號: CN103667344A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 朱向瑩;許可;翁仕強;曹躍瓊;金楊晟
• 申請（專利權）人: 上海吉凱基因化學技術有限公司
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N5/10;A61K48/00;A61P9/00
• 代理公司: 上海光華專利事務所 31219
• 代理人: 許亦琳;余明偉

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種激活促紅細胞生成素基因表達的方法。

背景技術

TALE（Transcription?activator-effectors）技術是一種嶄新的分子生物學工具。研究學者發現，來自植物病原體黃單胞菌（Xanthomonas）分泌的一種TALE蛋白的核酸結合域的氨基酸序列與其靶位點的核酸序列有著恒定的對應關系。利用TALE的序列模塊，可組裝成特異結合任何DNA序列的模塊化蛋白，從而達到靶向操作內源性基因的目的（Li?T，Huang?S，Jiang?W?Z，et?al.TAL?nucleases(TALNs):hybrid?proteins?composed?of?TAL?effectors?and?FokI?DNAcleavage?domain.Nucleic?Acids?Res.2011;39(1):359-372.）。

目前TALE技術主要有兩種應用：1）TALEN(transcription?activator-like(TAL)effector?nucleases)的基因敲除；2）TALEA(transcription?activator-like(TAL)effector?activator)的轉錄激活。TALEA的轉錄激活是將識別特異DNA序列的TALE與轉錄激活區域VP64（VP64Activation?Domain）融合，可構建成識別啟動子上特異DNA序列的轉錄激活因子TALEA，將TALEA質粒轉入細胞后，表達的融合蛋白結合啟動子附近的特異DNA序列，并通過VP64激活區域與PolII結合，激活目標基因的轉錄，從而提高了內源目標基因的表達（Zhang?F，Cong?L，Lodato?S，et?al．Efficient?construction?of?sequence-specific?TAL?effectors?for?modulating?mammalian?transcription．Nat?Biotechnol.2011;29(2):149-153.）。目前，TALEA已經成功運用到哺乳動物細胞中，Miller等利用人工設計的TALEA在人HEK293細胞中能夠激活內源性NTF3基因的轉錄并使其表達水平增加了20倍（Miller?JC，Tan?S，Qiao?G，et?al．A?TALE?nuclease?architecture?for?efficient?genome?editing．Nat?Biotechnol.2011;29(2):143-148.）。因為TALE技術無基因、細胞、物種限制，實驗設計簡單，毒性低、脫靶情況少等優點，TALE技術在酵母、動植物細胞的基因組定點修飾、遺傳疾病的基因療法及基因的功能研究等方面都有廣闊的應用前景。

骨髓間充質干細胞（MSC）是骨髓中除造血干細胞以外的一類具有高度可塑性的細胞群體，是骨髓基質細胞的前體細胞。在特定的誘導條件下具有向骨、軟骨、肌腱、心肌、神經、脂肪等基質細胞分化的能力（George?J,Goldstein?E，Abashidze?A,et?al.Erythropoietin?promotes?endothelial?progenitor?cell?proliferative?and?adhesive?properties?in?a?PI3-kinase-dependent?manner.Cardiovasc?Res.2005；68（2）：299-306.）。由于骨髓間充值干細胞具有采集方便、易于在體外培養、誘導和擴增以及免疫原性低等特性，被認為在細胞治療、基因治療、組織工程等領域具有廣闊的應用前景。近年來的許多動物實驗和臨床研究均證明，以干細胞為基礎的細胞移植在心血管疾病中的治療效果顯著。但目前研究發現，移植細胞在心肌微環境下發生凋亡可能是影響心功能改善效率的重要原因之一（Lange?C,Schroeder?J,Stute?N,et?al.High-potential?human?mesenchymal?stem?cells.Stem?Cells?Dev.2005;14(1):70-80.）。