[發(fā)明專利]人白細胞介素-12的編碼基因、真核宿主細胞和表達方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210345021.8
• 申請日: 2012-09-17
• 公開（公告）號: CN102876684A
• 公開（公告）日: 2013-01-16
• 發(fā)明（設計）人: 趙毅;李友海;章方良;柳振宇
• 申請（專利權）人: 青島康立泰藥業(yè)有限公司
• 主分類號: C12N15/24
• 分類號: C12N15/24;C12N5/10;C12N15/85
• 代理公司: 北京三友知識產(chǎn)權代理有限公司 11127
• 代理人: 龐東成;李棟修

1.人白細胞介素-12的編碼基因，其特征在于，所述編碼基因包含

(a).編碼人白細胞介素-12的P35亞基的核苷酸序列SEQ?ID?NO：9或其互補核苷酸序列以及編碼人白細胞介素-12的P40亞基的SEQ?ID?NO：10或其互補核苷酸序列；或者

(b).編碼人白細胞介素-12的P35亞基的核苷酸序列SEQ?ID?NO：21或其互補核苷酸序列以及編碼人白細胞介素-12的P40亞基的SEQ?ID?NO：22或其互補核苷酸序列。

2.如權利要求1所述的編碼基因，其特征在于，所述編碼基因包含編碼P35亞基的核苷酸序列SEQ?ID?NO：9以及編碼P40亞基的SEQ?ID?NO：10。

3.如權利要求1所述的編碼基因，其特征在于，所述編碼基因包含編碼P35亞基的核苷酸序列SEQ?ID?NO：21以及編碼P40亞基的SEQ?ID?NO：22。

4.一種表達人白細胞介素-12的真核宿主細胞，其特征在于，所述真核宿主細胞包含

(a).具有編碼P35亞基的核苷酸序列SEQ?ID?NO：9或其互補核苷酸序列的第一表達載體和具有編碼P40亞基的核苷酸序列SEQ?ID?NO：10或其互補核苷酸序列的第二表達載體；或者

(b).具有編碼P35亞基的核苷酸序列SEQ?ID?NO：21或其互補核苷酸序列的第一表達載體和具有編碼P40亞基的核苷酸序列SEQ?ID?NO：22或其互補核苷酸序列的第二表達載體。

5.如權利要求4所述的真核宿主細胞，其特征在于，所述真核宿主細胞包含具有編碼P35亞基的核苷酸序列SEQ?ID?NO：9的第一表達載體和具有編碼P40亞基的SEQ?ID?NO：10的第二表達載體。

6.如權利要求4所述的真核宿主細胞，其特征在于，所述真核宿主細胞包含具有編碼P35亞基的核苷酸序列SEQ?ID?NO：21的第一表達載體和具有編碼P40亞基的SEQ?ID?NO：22的第二表達載體。

7.如權利要求4～6中任一項所述的真核宿主細胞，其特征在于，所述真核宿主細胞為中國倉鼠卵巢(CHO)細胞，優(yōu)選為CHO-DG44或CHO-3E7細胞。

8.如權利要求4～6中任一項所述的真核宿主細胞，其特征在于，所述第一表達載體為pGN-35質粒。

9.如權利要求4～6中任一項所述的真核宿主細胞，其特征在于，所述第二表達載體為pCDNA3.1質粒。

10.一種人白細胞介素-12的表達方法，其特征在于，所述方法包括

(a).分別構建包含編碼P35亞基的核苷酸序列SEQ?ID?NO：9或其互補核苷酸序列的pGN-35質粒和包含編碼P40亞基的核苷酸序列SEQ?ID?NO：10或其互補核苷酸序列的pCDNA3.1質粒；或者

(b)分別構建包含編碼P35亞基的核苷酸序列SEQ?ID?NO：21或其互補核苷酸序列的pGN-35質粒和包含編碼P40亞基的核苷酸序列SEQ?ID?NO：22或其互補核苷酸序列的pCDNA3.1質粒

然后用步驟(a)或(b)中的pGN-35質粒和pCDNA3.1質粒共轉染真核宿主細胞，優(yōu)選為中國倉鼠卵巢(CHO)細胞，更優(yōu)選為CHO-DG44或CHO-3E7細胞。