[發明專利]血液細菌內毒素檢測試劑盒的制備和應用

有效

• 申請號: 201210343085.4
• 申請日: 2012-09-14
• 公開（公告）號: CN102901726A
• 公開（公告）日: 2013-01-30
• 發明（設計）人: 莫水晶;莫世文;莫世君
• 申請（專利權）人: 莫水晶;莫世文;莫世君
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N21/82;G01N1/38
• 代理公司: 廣州新諾專利商標事務所有限公司 44100
• 代理人: 劉菁菁

1.一種特異性鱟試劑的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

A.采血，加入與鱟血的體積比為1:6～1:10的抗凝劑；

B.分離細胞：將鱟血移至離心瓶內，在750-850轉/分的速度下離心分離，棄血清；

C.裂解細胞：將步驟B余下的鱟血細胞移至收集瓶內，按鱟血細胞體積的40%-50%的量加入細胞裂解液，裂解細胞得鱟血細胞溶解物；

D.分離細胞壁：按照與鱟血細胞溶解物的體積比為1:0.8～1:1.2的量向鱟血細胞溶解物中加入氯仿，并加入適量聚乙二醇8000，隨即混合形成混合溶液，然后離心，分離提取物，制得鱟試劑原液。

E.加入促活劑及G因子抑制劑，配制半成品：按鱟試劑原液體積與促活劑體積比為1:0.15～1:0.30的比例加入預先調配好的促活劑，按照鱟試劑原液體積與G因子抑制劑體積比為1:0.25～1:0.50的比例加入G因子抑制劑，攪勻，制成鱟試劑半成品。

F.灌裝、冷凍干燥和封口，制得特異性鱟試劑成品。

2.根據權利要求1所述的特異性鱟試劑的制備方法，其特征在于，步驟A中的抗凝劑是這樣配制的：向適量純化水中加入預配好的輔料溶液，使每100ml溶液中含咖啡因或茶堿0.015M～0.04M，含NaCl0.15M～0.35M。

3.根據權利要求1所述的特異性鱟試劑的制備方法，其特征在于，步驟C中的細胞裂解液是這樣配制的：向純化水中加入0.05M/ml的Tris-HCl溶液，調PH值為6.0～8.0。

4.根據權利要求1所述的特異性鱟試劑的制備方法，其特征在于，步驟D中的聚乙二醇8000在所述混合溶液中的濃度為1.5～3mg/ml。

5.根據權利要求1所述的特異性鱟試劑的制備方法，其特征在于，步驟E中的促活劑是這樣配制的：在適量純化水中加入KCl、MgSO₄或CaCl₂溶液，使每毫升促活劑含KCl?0.15～0.30M，含MgSO₄0.15～0.30M或含CaCl₂0.20～0.40M。

6.根據權利要求1所述的特異性鱟試劑的制備方法，其特征在于，步驟E中的G因子抑制劑是這樣配制的：在適量純化水中加入香菇多糖，使其在每毫升G因子抑制劑溶液中的含量為15mg～30mg。

7.一種采用權利要求1~6任一項所述的特異性鱟試劑的制備方法制備的特異性鱟試劑。

8.一種血液細菌內毒素檢測試劑盒，其特征在于，其組成包括權利要求7所述的特異性鱟試劑、體液處理劑I號、體液處理劑Ⅱ號、細菌內毒素質控品和檢查用水；

所述體液處理劑Ⅰ號是這樣配制的：分別稱取適量氯化鈉、緩血酸銨，用適量水溶解，使每毫升溶液含氯化鈉8.5mg～15mg，含緩血酸銨0.5～1mg，之后調節PH值為5.5～7.5；

所述體液處理劑Ⅱ號是這樣配制的：稱取適量緩血酸銨，用適量水溶解，使每毫升溶液中含緩血酸銨0.2mg～0.5mg，之后調節PH值為6.5～8.0。

9.一種血液中細菌內毒素的檢測方法，其特征在于，該檢測方法采用權利要求7所述的特異性鱟試劑或權利要求8所述的血液細菌內毒素檢測試劑盒測定血液樣本中的細菌內毒素。

10.根據權利要求9所述的血液中細菌內毒素的檢測方法，其特征在于，用所述特異性鱟試劑或所述血液細菌內毒素檢測試劑盒檢測血液樣本中的細菌內毒素時，檢測樣本按如下步驟制備：

①取血液樣本，按1：1的體積量加入體液處理劑Ⅰ號溶液，混勻15秒鐘-30秒鐘，2000轉/分～4500轉/分，離心2～10分鐘，取上清液，即為血液樣本2倍稀釋液；

②取2倍稀釋液，按1:1的體積量加入體液處理劑Ⅱ號溶液，混勻15秒鐘-30秒鐘，移至70～90℃條件下水浴加熱5分鐘～10分鐘，恒溫結束，在2000轉/分～4500轉/分，離心2～10分鐘，制得4倍稀釋液備用；

③取4倍稀釋液的上清液，按體積比1：1加入檢查用水，混勻，制得8倍稀釋液，即檢測樣本。