[發明專利]有序介孔碳構建的婦科腫瘤標志物免疫傳感器制備及應用

有效

• 申請號: 201210340812.1
• 申請日: 2012-09-15
• 公開（公告）號: CN102854235A
• 公開（公告）日: 2013-01-02
• 發明（設計）人: 魏琴;范海霞;李賀;張勇;吳丹;杜斌;于海琴;馬洪敏;龐雪輝;王志玲;羅川南;李慧芝;范大偉;曹偉;朱沛華;張永芳
• 申請（專利權）人: 濟南大學
• 主分類號: G01N27/48
• 分類號: G01N27/48;G01N27/327
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種有序介孔碳構建的婦科腫瘤標志物免疫傳感器的制備，其特征在于，包括以下步驟：

（1）有序介孔碳納米材料的制備；

（2）有序介孔碳-甲苯胺藍復合材料的制備；

（3）婦科腫瘤標志物電化學免疫傳感器的制備。

2.如權利要求1所述的有序介孔碳構建的婦科腫瘤標志物免疫傳感器的制備，其特征在于，所述有序介孔碳納米材料的制備，步驟如下：

（1）取0.40?~?0.50?g苯酚，1.4?~?1.8?mL?37%的甲醛溶液，10?~?13?mL?0.1?mol·L^-1的NaOH分別加入三口瓶中，70?℃攪拌反應液0.5?h；

（2）預先將0.64?~?0.80?g聚氧丙烯聚氧乙烯共聚物F127溶于44?~?54?mL超純水中，攪拌溶解，加入（1）反應液中，反應16?~?18?h，反應液由粉紅色轉變為紅色，當沉淀出現時，停止反應，反應液冷卻至室溫；

（3）加173?~?217?mL超純水于（2）得到的反應液中，混合均勻，轉移至反應釜中，在馬弗爐中130?℃反應24?h，冷卻至室溫，離心洗滌，室溫真空干燥，得粉末狀固體；

（4）將（3）中粉末狀固體放入管式爐，700?℃保持3?h，即得到有序介孔碳納米材料。

3.如權利要求1中所述的有序介孔碳構建的婦科腫瘤標志物免疫傳感器的制備，其特征在于，所述有序介孔碳-甲苯胺藍復合材料的制備，步驟如下：

（1）將濃度為2?mg·mL^-1的有序介孔碳溶液與濃度為2?mg·mL^-1的甲苯胺藍溶液以體積比1?:?0.5?~?1?:?2混合，在室溫條件下震蕩24?~?30?h；

（2）離心，用超純水清洗，采用透析法除去材料中游離的甲苯胺藍，即制得有序介孔碳-甲苯胺藍復合材料；

（3）將（2）中制得的復合材料重新分散于超純水中，配制成有序介孔碳-甲苯胺藍復合材料的混合液A，室溫儲存下備用。

4.如權利要求1中所述的婦科腫瘤標志物免疫傳感器的制備，其特征在于，所述電化學免疫傳感器的制備步驟如下：

（1）將直徑3?~?5?mm?的玻碳電極依次用1.0、0.3和0.05?mm?的三氧化二鋁拋光粉拋光處理，乙醇超聲清洗，超純水沖洗干凈，使電極表面呈鏡面；

（2）將5?~?8?μL混合液A滴涂到步驟（1）處理好的玻碳電極表面，室溫干燥；

（3）將5?~?8?μL濃度為10?μg·mL^-1婦科腫瘤標志物抗體滴涂到步驟（2）得到的電極表面，4?℃濕潤條件下晾干；

（4）將3?~?6??μL濃度為100?μg·mL^-1牛血清白蛋白滴涂到步驟（3）得到的電極表面，4?℃濕潤條件下晾干，超純水清洗，晾干成膜，4?℃保存，電化學免疫傳感器制備完成。

5.如權利要求1~4所述的制備的婦科腫瘤標志物電化學免疫傳感器，其特征在于，用于婦科腫瘤標志物的檢測，方法如下：

（1）工作曲線的繪制；

（2）婦科腫瘤標志物的檢測；

（1）中所述的工作曲線的繪制，步驟如下：

1）本發明將所述的婦科腫瘤標志物電化學免疫傳感器作為工作電極，在該工作電極表面上滴涂不同濃度的婦科腫瘤標志物抗原標準溶液，4?℃濕潤條件下晾干，超純水清洗，晾干，4?℃保存；

2）將參比電極—飽和甘汞電極、對電極—鉑柱電極和工作電極正確連接在電化學工作站上；

3）在pH=7.0?~?8.0磷酸鹽緩沖液中，通過方波伏安法檢測婦科腫瘤標志物抗原標準溶液滴加前后電流響應值的變化；

4）根據所得電流響應值與婦科腫瘤標志物抗原標準溶液濃度的關系，繪制工作曲線。

6.如權利要求1?~?5所述的婦科腫瘤標志物免疫傳感器，其特征在于，所述的婦科腫瘤標志物選自下列之一：原位性腫瘤相關物質（糖類抗原CA12-5、糖鏈抗原CA19-9、糖類抗原CA72-4、糖鏈抗原CA15-3、鱗狀上皮細胞癌抗原SCC、堿性磷酸酶ALP），胎盤性及胚胎性腫瘤相關物質（甲胎蛋白AFP、癌胚抗原CEA、組織多肽抗原TPA、人絨毛膜促性腺激素HCG），癌基因、抑癌基因及其產物（乳腺癌易感基因BRCA1、乳腺癌易感基因BRCA2）。