[發(fā)明專利]有序介孔碳構(gòu)建的婦科腫瘤標(biāo)志物免疫傳感器制備及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210340812.1
• 申請日: 2012-09-15
• 公開（公告）號: CN102854235A
• 公開（公告）日: 2013-01-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 魏琴;范海霞;李賀;張勇;吳丹;杜斌;于海琴;馬洪敏;龐雪輝;王志玲;羅川南;李慧芝;范大偉;曹偉;朱沛華;張永芳
• 申請（專利權(quán)）人: 濟(jì)南大學(xué)
• 主分類號: G01N27/48
• 分類號: G01N27/48;G01N27/327
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種有序介孔碳構(gòu)建的婦科腫瘤標(biāo)志物免疫傳感器制備及應(yīng)用。具體是基于有序介孔碳納米材料和離子液體，構(gòu)建的檢測多種婦科腫瘤標(biāo)志物的無標(biāo)記型電化學(xué)免疫傳感器，用于檢測血清中的婦科腫瘤標(biāo)志物。屬于新型納米功能材料與生物傳感技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

腫瘤（tumor）是人體組織細(xì)胞由于內(nèi)在和外界致病因素長時間的作用，導(dǎo)致細(xì)胞的遺傳物質(zhì)—脫氧核糖核酸（DNA）產(chǎn)生突變，使細(xì)胞的生長和分裂失去控制，從而發(fā)生異常增生和功能失調(diào)。腫瘤嚴(yán)重威脅人民健康，是近年來醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中備受重視的重大研究課題。

2010年中國深圳召開的國際抗癌聯(lián)盟大會預(yù)計：到2020年全球每年將有1600萬新增癌癥患者，每年有1000萬人死于癌癥。

其中乳腺癌、卵巢癌、多囊卵巢綜合癥、子宮內(nèi)膜癌、宮頸鱗癌、子宮頸癌等婦科腫瘤疾病嚴(yán)重影響了廣大女性的健康，引起了社會各界和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的廣泛關(guān)注。

近30年來，癌癥發(fā)病率每年以3%?~?5%的速度增長，80%的新發(fā)腫瘤在中國、印度、巴西和墨西哥等發(fā)展中國家，在世界范圍內(nèi)腫瘤成為第一死亡原因，超過了艾滋病、結(jié)核、瘧疾加起來的死亡原因。

以2007年為例，世界有790萬人口死于癌癥，世界衛(wèi)生組織指出，如果能早期進(jìn)行診斷并及時治療，80%?~?85?%的腫瘤都可以治愈。

腫瘤標(biāo)志物（tumor?marker）是指腫瘤組織及細(xì)胞所產(chǎn)生的活性物質(zhì)的異常表達(dá)，并可以此診斷或監(jiān)測腫瘤的發(fā)展。

腫瘤標(biāo)志物在正常組織或良性疾病不產(chǎn)生或產(chǎn)量甚微，而腫瘤病人的組織、體液及排泄物中則有大量分泌，測得值異常升高。腫瘤標(biāo)志物在腫瘤普查、診斷、治療、病情監(jiān)測、判斷預(yù)后、評價療效和高危人群隨訪觀察等方面都具有很大的實(shí)用價值。

多少年來婦科腫瘤學(xué)家致力于婦科腫瘤早期診斷方法的研究，期望找到一種簡易、敏感性特異性高的腫瘤標(biāo)志物。近十余年來，這項工程得到了飛速地發(fā)展，特異性血清檢測物的發(fā)現(xiàn)，挽救了大量婦科惡性腫瘤患者的生命。在治療過程中，通過標(biāo)志物作為病情監(jiān)測依據(jù)，避免了盲目性。

隨著現(xiàn)代生物技術(shù)包括蛋白質(zhì)組、酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）、實(shí)時定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）、熒光原位雜交技術(shù)（FISH）和解吸離子化飛行時間質(zhì)譜（SELDI-TOF-MS）等的飛速發(fā)展，逐漸發(fā)現(xiàn)了許多有應(yīng)用前景的腫瘤標(biāo)志物。

常用的婦科腫瘤標(biāo)志物有以下幾種：甲胎蛋白（AFP）、癌胚抗原（CEA）、絨毛膜促性腺激素（hCG）、糖類抗原CA12-5、糖類抗原CA19-9、糖類抗原CA72-4、鱗狀上皮細(xì)胞癌抗原（SCC）等，它們對臨床及病情監(jiān)測有重要參考價值。

腫瘤標(biāo)志物從發(fā)現(xiàn)、發(fā)展到現(xiàn)在，隨著檢測手段的不斷提高，有許多檢測方法。其中，具有推廣應(yīng)用價值或已被廣泛應(yīng)用的主要有：放射免疫分析法（RIA）、酶標(biāo)記免疫分析技術(shù)（EIA）、免疫放射分析法（IRMA）、免疫化學(xué)發(fā)光分析（CLIA）、時間分辨熒光免疫分析技術(shù)（TrFLA）、液體芯片檢測技術(shù)和SELDI-TOF-MS等。但這些技術(shù)一般需要復(fù)雜的監(jiān)測儀器，檢測時間長，普及性差，且有些試劑具有放射性，對人體有一定的危害。

電化學(xué)免疫傳感器是一種將電化學(xué)分析方法與免疫學(xué)技術(shù)相結(jié)合而發(fā)展起來的生物傳感器，其具有靈敏、特異、快速、成本低、操作簡單、易數(shù)字化和易實(shí)現(xiàn)實(shí)時輸出檢測等優(yōu)點(diǎn)，尤其適合于癌癥疾病的診斷。

另外，電化學(xué)免疫傳感器結(jié)合了納米材料大的比表面積、較強(qiáng)的吸附能力、良好的定向能力和生物兼容性等特點(diǎn)，顯著改善了傳感器的性能，為電化學(xué)免疫傳感器的研究和應(yīng)用開辟了一個新的天地。

有序介孔碳（OMC）是一類新型的介孔材料，1999年合成方法首次被Ryoo等人報道。由于介孔碳具有較高的比表面積、有序的孔徑分布，同時具有較高的機(jī)械強(qiáng)度、較強(qiáng)的吸附能力，可應(yīng)用于催化、儲氫、吸附等領(lǐng)域。

有序介孔碳的酸堿穩(wěn)定性良好，合成方法簡單，易于制得，其本身是很好的良導(dǎo)體，具有較好的導(dǎo)電性。

本發(fā)明采用有序介孔碳-甲苯胺藍(lán)復(fù)合材料為電極基體材料，利用離子液體導(dǎo)電率高、電位窗口寬，以及蛋白質(zhì)可與離子液體通過離子間的相互作用，連接婦科腫瘤腫瘤標(biāo)志物的抗體、抗原制得無標(biāo)記電流型免疫傳感器。本發(fā)明免疫傳感器的檢出限低，對多種婦科腫瘤標(biāo)志物的檢出限在0.68?~?1.3?pg·mL^-1之間。