[發明專利]一種肝吸蟲抗體IgG4生物素-親和素酶聯免疫檢測試劑盒及其檢測方法

無效

• 申請號: 201210338184.3
• 申請日: 2012-09-13
• 公開（公告）號: CN102830231A
• 公開（公告）日: 2012-12-19
• 發明（設計）人: 余傳信;王玠;沈雙;宋麗君;殷旭仁;許永良
• 申請（專利權）人: 江蘇省血吸蟲病防治研究所
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/558;G01N21/31
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所 32104
• 代理人: 時旭丹;劉品超

技術領域

本發明涉及一種肝吸蟲抗體IgG4生物素-親和素酶聯免疫檢測試劑盒及其檢測方法，屬于寄生蟲病免疫檢測領域。

背景技術

肝吸蟲病是嚴重危害人體健康的一種人獸共患病，由華支睪吸蟲、麝貓后睪吸蟲和貓后睪吸蟲等引起，主要分布于遠東，如中國、日本、朝鮮、越南和中南亞國家。我國除青海、寧夏、新疆、內蒙古、西藏等尚無報道外，已有24個省、市、自治區有不同程度流行，人群感染率在1%～30%之間。而保蟲宿主動物感染的地區范圍更廣，感染率與感染度多比人體感染高，對人群的感染具有潛在的威脅。我國的肝吸蟲病主要是華支睪吸蟲感染所致，至少已有2300年以上的流行歷史。由于肝吸蟲寄生于人的肝膽管內，其占位性機械擠壓作用和排泄分泌物的長期刺激作用所引起的肝、膽組織炎性病變，可引起嚴重的肝臟功能損害，甚至癌變。一些地區長期以來形成的食生或半生淡水魚和蝦的飲食習慣，是引發肝吸蟲病的重要原因，我國肝吸蟲病的流行呈東高西低趨勢，主要流行于廣東、廣西、黑龍江、吉林、江蘇等省。經過50多年的積極防治，我國肝吸蟲病的防治工作取得了顯著的成績，各地區人群感染率均有不同程度的下降。但隨著我國經濟社會的發展，生活水平的提高，人們開始追求飲食方式的多樣化，生魚片、火鍋和燒烤等飲食方式又重新流行，進食未完全煮熟的魚制品，或居民烹飪生魚時不注意廚具的衛生等均會導致肝吸蟲病的發生。肝吸蟲病的發病率又有上升之勢，全年肝吸蟲病的發病人數可高達1000-1500萬，是當前我國最嚴重的食源性寄生蟲病之一，嚴重危害我國人民的健康和社會經濟發展。

肝吸蟲因寄生在宿主的膽道中，臨床癥狀不明顯，由于缺乏特異性癥狀和體征，給臨床診斷帶來了一定的困難。華支睪吸蟲病的診斷主要依靠實驗室診斷。目前實驗室診斷方法主要有如下幾種：

病原學檢測

（1）糞便查蟲卵法，主要有鹽酸乙醚離心沉淀法，細篩定量透明法，小杯稀釋計數法，檢測病人糞便中是否存在肝吸蟲蟲卵。由于肝吸蟲蟲卵小，排量少，在糞便中的分布不均，容易漏檢，尤其是早期感染者陽性率低。

（2）十二指腸引流液查蟲卵法，膽汁中含蟲卵較多，陽性率高，但只適合于部分住院病人檢查。

病原學檢測法具有確診價值，但因操作復雜，不易被檢驗人員及病人所接受，易漏檢，難以滿足應用的需要。

B超檢測

肝吸蟲寄生于肝膽管中，引起肝實質、肝膽管及膽囊的組織病變，如肝組織硬化，肝膽管、膽囊壁組織增厚，纖維化，引起膽道及膽囊擴張。在B超及CT檢測時出現不同的組織病變特征，表現為：肝臟型，肝實質點狀回聲增強，增粗，有短棒狀、索狀或網狀回聲，肝內光點密集不均勻；膽管型，膽管擴張，管壁粗厚，回聲增強，擴張的膽管內有點狀、索狀、斑塊狀或線形回聲；膽囊型，膽囊壁增厚、粗糙，囊內有點狀、棒狀、索狀、飄帶狀、條形或斑塊形回聲，有時伴有小結石或膽泥；混合型，可同時出現上述2種以上類型。由于其它肝膽管病變同樣可以出現類似病變體征，B超檢測沒有特異性，只能作為臨床診斷的一個輔助手段。

CT檢測

患者均有不同程度的肝內彌漫性膽管擴張，多為肝被膜下小膽管呈囊狀或杵狀擴張，近肝門側肝內膽管向被膜側均勻擴張。少數病例的膽囊內可見團塊狀或不規則似軟組織密度的條狀物漂浮在膽汁中，個別病例胰管輕度擴張。CT檢測可作為臨床診斷的參考。

免疫學檢測

肝吸蟲的排泄分泌物可以刺激宿主免疫系統，產生抗肝吸蟲抗原免疫反應。檢測肝吸蟲抗原特異性免疫反應或免疫反應的產物，如肝吸蟲抗原特異性抗體IgG(IgG1、IgG2、IgG3和IgG4亞型)具有輔助診斷價值。常用的方法有：皮內試驗，是檢測肝吸蟲感染誘導的抗肝吸蟲抗原變態反應，曾經是一種常用的肝吸蟲感染篩查方法，但因存在假陽性，使用中可能會引起過敏反應，存在生物安全風險，現已被停止使用。

抗體檢測試驗，有間接血凝試驗、對流免疫電泳試驗、酶聯免疫吸附試驗、間接熒光抗體試驗等均是檢測肝吸蟲感染刺激產生的抗肝吸蟲抗原抗體IgG，由于這些方法均使用粗制肝吸蟲成蟲抗原，但檢測病人結果出入較大，且與其它寄生蟲感染(尤其是肺吸蟲、血吸蟲及旋毛蟲類感染)有較明顯的交叉反應，不能用作確診，僅作為流行病學調查初篩之用。