[發明專利]一種檢測傳染性喉氣管炎病毒的液相芯片方法

有效

• 申請號: 201210337807.5
• 申請日: 2012-09-12
• 公開（公告）號: CN102851395A
• 公開（公告）日: 2013-01-02
• 發明（設計）人: 王慧煜;韓雪清;林祥梅;梅琳;李志輝
• 申請（專利權）人: 中國檢驗檢疫科學研究院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;C40B40/06;G01N21/64
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛;張慶敏

1.一種檢測傳染性喉氣管炎病毒的引物，其核苷酸序列為：

ILTV-F:5’-AAAACTTGAATGTCGGGAGG-3’，

ILTV-R:5’-ATGTTGGAGTGTGTTGGAATGTCA-3’，在ILTV-R引物的5’端用生物素標記。

2.一種與權利要求1所述引物配合使用的檢測傳染性喉氣管炎病毒的探針，其核苷酸序列為：

5’-GCCCCACTAAGAATAATGAACCACG-3’，在其5’端用氨基修飾。

3.一種用于檢測傳染性喉氣管炎病毒的液相芯片，其特征在于，是權利要求2所述的檢測探針與熒光標記微球偶聯制成的特異性檢測微球。

4.如權利要求3所述的液相芯片，其特征在于，每6.25×10⁵個熒光微球加入濃度為0.1nmol/μL的探針2μL。

5.一種用于檢測傳染性喉氣管炎病毒的液相芯片檢測試劑盒，其特征在于，含有權利要求1所述的引物和權利要求3或4所述的液相芯片。

6.如權利要求5所述的試劑盒，其中權利要求1所述的引物進行PCR擴增的25μL工作體系為：10×buffer?2.5μL，10mmol/L?dNTP2.0μL，taq?DNA聚合酶0.5μL，DNA模板2.0μL，10μmol/L上游引物ILTV-F?0.5μL，10μmol/L下游引物ILTV-R?1.0μL，不含RNA酶的ddH₂O?16.5μL。

7.如權利要求5所述的試劑盒，其中權利要求1所述的引物進行PCR擴增的工作條件為：95℃預變性5min；94℃變性40s，58℃退火40s，72℃延伸40s，共35個循環；72℃延伸10min。

8.如權利要求5所述的試劑盒，其中權利要求1所述的引物的PCR擴增產物與液相芯片雜交的工作條件為：95℃變性5min后，54℃雜交30min。

9.權利要求1所述的引物在制備傳染性喉氣管炎病毒液相芯片檢測試劑盒中的應用。

10.權利要求2所述的探針在制備傳染性喉氣管炎病毒液相芯片檢測試劑盒中的應用。