[發(fā)明專(zhuān)利]一種透膜肽介導(dǎo)的反義抗菌劑及其制備方法和應(yīng)用

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210335017.3
• 申請(qǐng)日: 2012-09-12
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102827251A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-12-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 羅曉星;孟靜茹;馬雪;薛小燕;賈敏;侯征;達(dá)飛;桑國(guó)軍
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C07K7/06
• 分類(lèi)號(hào): C07K7/06;A61K48/00;A61K47/48;A61P31/04
• 代理公司: 北京中知法苑知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11226
• 代理人: 常玉明;張?zhí)m海

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種透膜肽介導(dǎo)的反義抗菌劑及其制備方法和應(yīng)用。?

背景技術(shù)

金黃色葡萄球菌是醫(yī)院內(nèi)感染和社區(qū)獲得感染最常見(jiàn)、最重要的致病菌，隨著抗生素的廣泛應(yīng)用，金葡菌的耐藥情況愈來(lái)愈嚴(yán)重。目前，90%以上的金葡菌對(duì)青霉素耐藥，自1961年英國(guó)首次報(bào)道耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（methicillin?resistant?staphylococcus?aureus，MRSA）至今，由MRSA引起的感染已經(jīng)遍及全球，且其檢出率不斷增高。MRSA對(duì)所有β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素和其他多種抗菌藥物耐藥，因此由MRSA引起的感染，治療十分困難，死亡率很高。目前治療MRSA最有效的藥物是萬(wàn)古霉素，然而隨著耐萬(wàn)古霉素MRSA的出現(xiàn)，人們即將面臨無(wú)藥可用的境地，因此尋找新的特異性抗MRSA感染的新靶點(diǎn)及新策略成為細(xì)菌感染治療領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)和難點(diǎn)。?

傳統(tǒng)的抗菌藥物的研發(fā)主要是對(duì)已知抗生素進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，然而按照這種方法發(fā)現(xiàn)新先導(dǎo)物變得越來(lái)越困難，同時(shí)細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性的速度遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)新抗菌藥物的研發(fā)速度，所以必須尋找新的突破口。由于具有全新作用模式的抗菌藥物可以大大減慢細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性的速度，因此目前抗菌藥物的研究主要集中在尋找新的作用靶標(biāo)和新的作用模式的藥物。2005年美國(guó)AVI公司提出的反義抗菌劑是一種具有全新作用模式的抗菌藥物——通過(guò)RNase?H介導(dǎo)的靶RNA的降解及抑制DNA的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后的加工和翻譯等方式而抑制致病菌基因的轉(zhuǎn)錄、翻譯進(jìn)而抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)、繁殖，從而達(dá)到減毒、抑制或殺滅細(xì)菌的目的，該類(lèi)藥物是最具研發(fā)潛能的新型抗菌藥物。?

與傳統(tǒng)藥物相比，以細(xì)菌治病基因?yàn)榘悬c(diǎn)的反義抗菌劑因具有高特異性、高效性、低毒、安全等特點(diǎn)，是極具開(kāi)發(fā)潛能的新型抗菌藥物。在眾多種類(lèi)的反義分子中鎖核酸（LNA）作為一種新穎的核苷酸衍生物引起了人們的廣泛關(guān)注，有希望成為分子水平治療各種疾病的突破口。LNA是一種特殊的雙環(huán)狀寡核苷酸衍生物，結(jié)構(gòu)中核酸的2′-O,4′-C位通過(guò)不同的縮水作用形成氧亞甲基橋、硫亞甲基橋或胺亞甲基橋，并連接成環(huán)形，形成了剛性的縮合結(jié)構(gòu)，增加了磷酸鹽骨架局部結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性。由于LNA與DNA/RNA在結(jié)構(gòu)上具有相同的磷酸鹽骨架，所以它對(duì)DNA、RNA有很好的識(shí)別能力和強(qiáng)大的親和力，與其他寡核苷酸類(lèi)似物相比，LNA有很多優(yōu)點(diǎn)：1）和DNA、RNA互補(bǔ)的雙鏈有很強(qiáng)的熱穩(wěn)定性；2）具有抗3′脫氧核苷酸酶降解的穩(wěn)定性；3）LNA-DNA雜交物能激活RNase?H；4）體內(nèi)無(wú)毒性作用；5）有高效的自動(dòng)寡聚化作用，合成方法相對(duì)簡(jiǎn)單，部分或完全修飾的LNA寡核酸鏈可用氨基磷?酸法在DNA自動(dòng)合成儀上合成，由此可見(jiàn)，LNA是一種理想的反義藥物。?

然而，LNA充分發(fā)揮其反義作用的前提是必須在細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)的靶mRNA結(jié)合部位達(dá)到有效濃度，而LNA是荷負(fù)電荷的大分子化合物，不易透過(guò)細(xì)菌的細(xì)胞壁和細(xì)胞膜、胞內(nèi)濃度低，并能非特異性的被機(jī)體細(xì)胞所攝取，因此高效的、特異性靶向細(xì)菌的遞藥載體是限制反義抗菌劑研制的瓶頸問(wèn)題。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于通過(guò)對(duì)MRSA細(xì)胞分裂的關(guān)鍵蛋白——絲狀溫度敏感蛋白Z（flamentous?temperature-sensitive?protein?Z，F(xiàn)tsZ）的結(jié)構(gòu)基因ftsZ?mRNA為靶點(diǎn)進(jìn)行研究，提供一種透膜肽介導(dǎo)的反義抗菌劑及其制備方法和應(yīng)用。?

本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的：?

一種透膜肽介導(dǎo)的反義抗菌劑，包含(KFF)₃K-Cys-SMCC-C₆-LNA787，所述的(KFF)₃K-Cys-SMCC-C₆-LNA787為透膜肽(KFF)₃K與LNA787之間以半胱氨酸-〔4-(N-馬來(lái)酰亞胺甲基)-1-環(huán)己酰胺〕-己烷進(jìn)行連接；?

所述LNA787的序列為5'-T+*GA+CT*C+GCC*A+C+CA*GTAA*TA+T+*T-3'，其中A為腺嘌呤核苷酸單體，T為胸腺嘧啶核苷酸單體，C為胞嘧啶核苷酸單體，G為鳥(niǎo)嘌呤核苷酸單體；*X代表硫代修飾，X+代表LNA修飾，X為A、T、C或G；?

所述硫代修飾的核苷酸如式（Ⅰ）所示，所述LNA修飾的核苷酸結(jié)構(gòu)中2′-O位和4′-C位通過(guò)縮水作用形成氧亞甲基橋，并連接成環(huán)形，如式（Ⅱ）所示：?

所述透膜肽(KFF)₃K的序列為5'-KFFKFFKFFK-3'，其中K為賴(lài)氨酸，F(xiàn)為苯丙氨酸。?