[發(fā)明專利]一種膽汁中?；蛆Z去氧膽酸鈉的含量測定方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210334157.9
• 申請日: 2012-09-11
• 公開（公告）號: CN103675187A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發(fā)明（設計）人: 費文靜;錢勇;丁慧;諸晨;許紀峰;謝天培
• 申請（專利權）人: 上海詩丹德生物技術有限公司
• 主分類號: G01N30/89
• 分類號: G01N30/89
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發(fā)明涉及一種從膽汁中檢測牛磺鵝去氧膽酸鈉(Sodium?taurochenodeoxycholate)含量的方法，屬于醫(yī)藥技術領域。

背景技術

膽汁酸鹽是膽汁的主要活性成分，主要有清熱解毒、化痰利濕等作用

?；蛆Z去氧膽酸鈉，分子式為：C₂₆H₄₄NNaO₆S，分子量521.68，CAS號為6009-98-9，其結構如圖：

現(xiàn)有檢測方法靈敏度較低、重復性較差，不適合用于檢測膽汁中的?；蛆Z去氧膽酸鈉。因此有必要探索出更易操作、更準確的含量測定方法。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的是提供一種易操作、準確度高的膽汁中?；蛆Z去氧膽酸鈉的含量測定方法。

本發(fā)明可以通過下列步驟來實現(xiàn)：

(1)將膽汁用乙醇超聲提取。

(2)將提取液過濾，得到供試品溶液。

(3)使用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的C18色譜柱。

(4)高效液相色譜儀設置如下：采用乙腈-0.03％三乙胺水溶液梯度洗脫，0～30min15％乙腈～90％乙腈；流速為1ml/min；柱溫25℃；進樣量20μ1；

(5)ELSD檢測器設置如下：霧化溫度105℃，氣體流速3L/min。

在步驟(1)中，所用的溶劑為純乙醇，超聲時間為20min(220W，40kHz)。

在步驟(2)中，所用的濾膜為0.45μm。

在步驟(3)中，所用的固定相是十八烷基硅烷鍵合硅膠。

在步驟(4)中，所用的流動相為乙腈：0.03％三乙胺水溶液，梯度洗脫；流動相的流速為1ml/min；柱溫為25℃或者為室溫；進樣量20μl。

在步驟(5)中，ELSD的霧化溫度為105℃，氣體流速為3L/min。

與其他檢測方法相比，本發(fā)明的有益效果如下：(1)準確度高，重現(xiàn)性好，結果可靠；(2)方法操作簡便、實用性強，適合于膽汁的含量測定。

附圖說明

圖1為本發(fā)明方法實施例1的含量測定色譜圖。

圖2為本發(fā)明方法實施例2的含量測定色譜圖。

圖3為本發(fā)明方法實施例3的含量測定色譜圖。

具體實施方式

下面結合具體實施方式對本發(fā)明作進一步的詳細描述，但本發(fā)明不僅限于所述實施例。

實施例1：

色譜條件與系統(tǒng)適應性：色譜柱使用Agilent?ZORBAX?Extend?C18(4.6×250mm，5μm)；流動相為乙腈-0.03％三乙胺水溶液梯度洗脫，0～30min15％乙腈～90％乙腈；流速1ml/min；ELSD霧化溫度105℃，氣體流速3L/min；柱溫為25℃，進樣量20μl；

供試品溶液的制備：取膽汁約0.5g，精密稱定，置25ml容量瓶中，加入適量乙醇，超聲處理(220W，40kHz)20min，放冷，用乙醇定容至刻度，搖勻。用0.45μm的微孔濾膜過濾，即得。

標準品溶液的制備：精密稱取牛磺鵝去氧膽酸鈉對照品12.3mg，置于25ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻；即得。

測定法：精密吸取供試品和對照品溶液各20μl，注入高效液相色譜儀，測定，即得。

結果：測得膽汁中牛磺鵝去氧膽酸鈉的含量為0.51％。供試品和對照品圖譜見圖1。

實施例2：

色譜條件與系統(tǒng)適應性：色譜柱使用Symmetrix?ODS-R(4.6×250mm，5μm)；流動相為乙腈-0.03％三乙胺水溶液梯度洗脫，0～30min15％乙腈～70％乙腈；流速lml/min；ELSD霧化溫度105℃，氣體流速3L/min；柱溫為室溫；進樣量為10μl；

供試品溶液的制備：取膽汁約0.5g，精密稱定，置25ml容量瓶中，加入適量乙醇，超聲處理(220W，40kHz)20min，放冷，用乙醇定容至刻度，搖勻。用0.45μm的微孔濾膜過濾，即得。

對照品溶液的制備：精密稱取?；蛆Z去氧膽酸鈉對照品11.8mg，置于25ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻；即得。

測定法：精密吸取供試品和對照品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，測定，即得。

結果：測得膽汁中牛磺鵝去氧膽酸鈉的含量為0.47％。供試品和對照品圖譜見圖2。

實施例3：