[發明專利]一種PIK3CA基因突變熒光定量PCR分型檢測試劑盒及其檢測方法

無效

• 申請號: 201210330990.6
• 申請日: 2012-10-18
• 公開（公告）號: CN102851368A
• 公開（公告）日: 2013-01-02
• 發明（設計）人: 邵琦
• 申請（專利權）人: 廣州達健生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N21/64
• 代理公司: 廣州三環專利代理有限公司 44202
• 代理人: 劉孟斌

1.一種PIK3CA基因突變熒光定量PCR分型檢測試劑盒，其特征在于，包括PCR混合反應液、陽性對照品和用于檢測PIK3CA基因突變基因型的熒光探針，所述PCR混合反應液中包含擴增突變位點所處PIK3CA基因區段的PCR引物。

2.根據權利要求1所述的PIK3CA基因突變熒光定量PCR分型檢測試劑盒，其特征在于，所述突變位點位于PIK3CA基因的第9外顯子和/或第20外顯子;位于PIK3CA基因第9外顯子的突變位點為PIK3CA基因第542和/或545核苷酸；位于PIK3CA基因第20外顯子的突變位點為PIK3CA基因第1047核苷酸。

3.根據權利要求1所述的PIK3CA基因突變熒光定量PCR分型檢測試劑盒，其特征在于，所述PCR引物包括以下兩組引物對中的至少一組：

針對PIK3CA基因第9外顯子中突變位點所處區域的引物對，其PCR正向引物的序列如SEQ?ID?NO:1所示，PCR反向引物的序列如SEQ?ID?NO:2所示；

針對PIK3CA基因第20外顯子中突變位點所處區域的引物對，其PCR正向引物的序列如SEQ?ID?NO:6所示，PCR反向引物的序列如SEQ?ID?NO:7所示。

4.根據權利要求1所述的PIK3CA基因突變熒光定量PCR分型檢測試劑盒，其特征在于，所述熒光探針包括如SEQ?ID?NO:3、SEQ?ID?NO:4、SEQ?ID?NO:5、SEQ?ID?NO:8和SEQ?ID?NO:9所示的核苷酸序列中的至少一種。

5.根據權利要求4所述的PIK3CA基因突變熒光定量PCR分型檢測試劑盒，其特征在于，所述熒光探針包括如SEQ?ID?NO:3、SEQ?ID?NO:4和SEQ?ID?NO:5中的至少一種時，所述陽性對照品是存在PIK3CA基因第9外顯子的第542核苷酸和第545核苷酸堿基置換突變的混合質粒基因組DNA，其中，第542核苷酸為G→A突變，第545核苷酸也是G→A突變。

6.根據權利要求4所述的PIK3CA基因突變熒光定量PCR分型檢測試劑盒，其特征在于，所述熒光探針包括如SEQ?ID?NO:3和SEQ?ID?NO:4一種或者兩種時，所述陽性對照品是存在PIK3CA基因第20外顯子的第1047核苷酸質粒基因組DNA，其中，第1047核苷酸為A→G突變。

7.一種PIK3CA基因突變熒光定量PCR分型檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）根據PIK3CA基因突變位點的多態性，設計PCR反應引物和針對PIK3CA基因突變位點的熒光探針，所述PCR反應引物擴增出的靶多核苷酸片段中包含突變位點所處PIK3CA基因區段；

（2）在PCR反應體系中加入包含PCR引物的PCR混合反應液，以及所述步驟(1)中設計的熒光探針；

（3）向所述的步驟(2)得到的反應體系中加入樣本，進行熒光定量PCR檢測。

8.根據權利要求6所述的PIK3CA基因突變熒光定量PCR分型檢測方法，其特征在于，所述突變位點位于PIK3CA基因的第9外顯子和/或第20外顯子;位于PIK3CA基因第9外顯子的突變位點為PIK3CA基因第542和/或545核苷酸；位于PIK3CA基因第20外顯子的突變位點為PIK3CA基因第1047核苷酸。

9.根據權利要求6所述的PIK3CA基因突變熒光定量PCR分型檢測方法，其特征在于，所述PCR引物包括以下兩組引物對中的至少一組：

針對PIK3CA基因第9外顯子中突變位點所處區域的引物對，其PCR正向引物的序列如SEQ?ID?NO:1所示，PCR反向引物的序列如SEQ?ID?NO:2所示；

針對PIK3CA基因第20外顯子中突變位點所處區域的引物對，其PCR正向引物的序列如SEQ?ID?NO:6所示，PCR反向引物的序列如SEQ?ID?NO:7所示。

10.根據權利要求6所述PIK3CA基因突變熒光定量PCR分型檢測方法，其特征在于，所述熒光探針包括如SEQ?ID?NO:3、SEQ?ID?NO:4、SEQ?ID?NO:5、SEQ?ID?NO:8和SEQ?ID?NO:9所示的核苷酸序列中的至少一種。