[發明專利]一種高純度蛋黃卵磷脂的制備方法

有效

• 申請號: 201210330558.7
• 申請日: 2012-09-10
• 公開（公告）號: CN102863469A
• 公開（公告）日: 2013-01-09
• 發明（設計）人: 徐斌;姜松;孫俊;董英;李波;高志
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: C07F9/10
• 分類號: C07F9/10
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 樓高潮

1.一種高純度蛋黃卵磷脂的制備方法，其特征在于按照下述步驟進行：

（1）蛋黃、蛋清分離：首先對新鮮雞蛋檢查消毒，破殼后將蛋黃、蛋清分離，蛋黃攪拌均勻后，得到新鮮蛋黃液；其中消毒條件為95～100?℃的沸水中，浸泡5～7?s；

（2）中性脂質的提取：將新鮮蛋黃液與水按重量比1:1～1:3稀釋并攪拌均勻后加入到超聲波提取罐中，并向提取罐中加入1～9倍體積的質量分數為80～95%乙醇溶液，隨后采用脈沖超聲波進行輔助提取，提取0.1～1?h后將混合物經離心或過濾分離，反復提取1～5次，合并醇提取液即為蛋黃中性脂質提取液，其中脈沖超聲波頻率20～200?KHz，提取溫度20～70?℃，提取時間10～60?min，脈沖間隔1～5?s；?

（3）濃縮，干燥：將（2）中所得的蛋黃中性脂質提取液于40～50?℃下減壓濃縮至稠膏狀，回收溶劑，將所得稠膏狀物于50～65?℃下真空干燥，即得淺黃色蛋黃卵磷脂粗提物；

（4）亞臨界流體脫除蛋黃油：將經步驟（3）獲得的蛋黃卵磷脂粗提物裝入萃取釜，將萃取釜抽真空，利用壓力差將溶劑罐內亞臨界丙烷或亞臨界丁烷注入萃取釜內進行攪拌式逆流浸提，整個萃取過程在完全封閉的工藝條件下完成；其中萃取條件為：浸提次數1～5次，料液比1:1～1:6，萃取時間10～120?min，攪拌速度35～100?r/min，萃取溫度10～90?℃，其中優選40～60?℃，壓力0.2～1.0?Mpa；經脫除蛋黃油后的卵磷脂記作蛋黃卵磷脂復合物；

（5）蛋黃卵磷脂復合物脫溶：首先采用蒸汽或熱水對萃取釜進行加熱，并攪拌，加熱溫度10～110?℃，攪拌速度30～100?r/min，待萃取釜壓力降到0.01?MPa，啟用真空泵進行負壓蒸發，直至壓力降至–0.09?MPa以下；打開萃取釜，排出低溫脫油蛋黃卵磷脂；氣化后的丁烷經壓縮、冷凝液化后，回到溶劑儲罐中循環使用；?

（6）磁性納米載體的制備：采用化學共沉淀法：將可溶性的七水硫酸亞鐵和六水氯化鐵溶解于水溶液中，二者摩爾比為1:2～2:1，總鐵離子濃度為0.01～0.5?mol/L；機械攪拌轉數為200～800?r/min；然后加入聚乙二醇6000，其中加入量為總鐵質量的1/10；控制溫度為40～70?℃，除氧30?min；之后在機械攪拌狀態下，快速加入質量濃度為25%氨水或氫氧化鈉堿溶液，使反應溶液的pH?>10，攪拌反應10?min后在劇烈攪拌狀態下緩慢加入質量濃度為5?%的羧甲基殼聚糖溶液，CM-CTS溶液的加入量為總反應溶液體積的1/10，加樣完畢后將溫度迅速升高到70～90?℃反應30～120?min；反應結束后，在外加磁場的作用下快速分離出磁性顆粒，用去離子水清洗數次以去除未反應完全的化學物質，直至最后溶液的pH在7左右；最后收集黑色的磁性羧甲基殼聚糖納米顆粒，并進行冷凍干燥處理;然后采用Ca²⁺對磁性羧甲基殼聚糖納米顆粒表面進一步修飾，工藝條件如下：1?mg/mL?磁性羧甲基殼聚糖納米顆粒分別與2?mg/mL的Ca²⁺溶液混合，調節混合溶液的pH值到5.0～8.0，并于200～800?r/min的持續攪拌狀態下，于25～50?℃的恒溫條件下動態吸附30～120?min，使其達到吸附平衡，制備得到Ca²⁺修飾的固定化金屬離子親和磁性納米顆粒，其中提供Ca²⁺的可能是氯化鈣、碳酸鈣、磷酸鈣、草酸鈣、醋酸鈣中的一種或者兩種的組合；

（7）PC分離純化：采用質量分數為80～95%乙醇溶液溶解步驟（5）所得的脫溶蛋黃磷脂復合物，之后加入Ca²⁺修飾的固定化金屬離子親和磁性納米顆粒，在0～37?℃攪拌反應10～180?min，使溶液中的PE特定地吸附在Ca²⁺修飾的固定化金屬離子親和磁性納米顆粒表面，在外加磁場的作用下將吸附有PE的磁性納米顆粒從反應溶液中分離出來，收集吸附液，采用高效液相色譜一蒸發光散射測定法測定PC含量和純度；

（8）?PC脫色：對高純蛋黃卵磷脂進行中性活性炭脫色處理，脫色溫度?25～45?℃、加樣量?2.0～5.0%、脫色時間為30～90?min。

2.根據權利要求1所述的一種高純度蛋黃卵磷脂的制備方法，其特征在于步驟（2）中脈沖超聲波頻率20～80?KHz；提取溫度45～60?℃；提取時間10～60?min，步驟（4）中萃取溫度40～60?℃。