[發(fā)明專利]一種判別棘頭梅童魚產(chǎn)地和生活史的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210330300.7
• 申請日: 2012-09-07
• 公開（公告）號: CN102792912A
• 公開（公告）日: 2012-11-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楊健;劉洪波;姜濤
• 申請（專利權(quán)）人: 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心
• 主分類號: A01K61/00
• 分類號: A01K61/00
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務(wù)所 32104
• 代理人: 殷紅梅

1.一種判別棘頭梅童魚產(chǎn)地和生活史的方法，其特征是：采用以下工藝步驟：

(1)、野外采集不同水域的棘頭梅童魚樣本先放入清潔的塑料自封袋中，并在0～4℃保存，在此溫度條件下盡快運回實驗室保存；

（2）、野外采集并運回實驗室保存的棘頭梅童魚，取體長規(guī)格接近的樣本轉(zhuǎn)移于-18～-20℃冰箱內(nèi)保存，待用；

（3）、棘頭梅童魚耳石樣本前處理方法：

(3-1)、取出樣本左或右側(cè)矢耳石解凍后，經(jīng)超純水清除表面的有機質(zhì)，清洗干凈后，室溫下晾干、干燥保存作為分析的材料待用；

(3-2)、取含聚氨酯膠成分>25%的熱熔膠將耳石平滑的面固定在載玻片上，等熱熔膠冷卻10～15分鐘變硬后，先將耳石在500目水砂紙上進行粗磨，并隨時在正置金相顯微鏡上用透反射光觀察表面狀況，待首次觀察到輪紋時換用1200目水砂紙細磨2～5分鐘使表面平滑，然后用酒精燈將熱熔膠熔化后取出耳石；

(3-3)、將未磨過的光面耳石用雙面膠將其固定在鑲樣模內(nèi)，做好樣本標簽，將冷鑲嵌用透明的環(huán)氧樹脂和硬化劑的質(zhì)量比為5:1的比例調(diào)勻后，往每個鑲樣模內(nèi)注入3～4?ml混合樹脂溶液，將耳石包埋于其中；放入40℃～45℃的干燥箱中烘12小時～15?小時至完全固化；

(3-4)、取出鑲樣模內(nèi)包埋有耳石的固化樹脂塊，選用500目水砂紙對未磨過的光面耳石進行粗磨，待粘在耳石上的雙面膠全部磨掉后換用1200目水砂紙進行精磨，期間隨時在金相顯微鏡上觀察表面狀況，用透反射光確認磨至

核心后，將樹脂塊洗凈待用；

(3-5)、使用金剛石拋光液和MD拋光布以120～150rpm的轉(zhuǎn)速在拋光機上拋光3～5分鐘至耳石表面無刮痕為止；將所有拋光的樹脂塊放入超純水環(huán)境中進行超聲清洗3～5分鐘后，自然晾干24小時為耳石樣本；

（4）、棘頭梅童魚耳石樣本微區(qū)分析：

(4-1)、將耳石樣本置于真空鍍膜機中，在真空度達到≦2x10^-4Pa，電流達到35A～36A時，鍍碳薄膜20～25秒；

(4-2)、從耳石樣本核心順著最長橫軸向邊緣用電子探針顯微分析儀進行耳石樣本的定量線EPMA分析；在測Sr、Ca元素的濃度值之前先做機器狀態(tài)校驗和標準分析，利用碳酸鈣、碳酸鍶或鈦酸鍶作為檢驗定量測定結(jié)果的標準物質(zhì)；

(4-3)、由上述電子探針顯微分析儀沿耳石樣本矢狀面所獲各點定量線分析數(shù)據(jù)用Sr和Ca含量的比率值表示；每個測定點到耳石核心的距離被稱為耳石徑，統(tǒng)一使用鍶含量/鈣含量×10³的比值表示，簡稱Sr/Ca比值；耳石不同區(qū)域Sr:?Ca的含量比值數(shù)據(jù)用平均值±標準差進行統(tǒng)計分析；差異的顯著水平判定用曼-惠特尼U測驗進行；根據(jù)Sr:?Ca含量比值的顯著性差異水平，區(qū)別棘頭梅童魚的產(chǎn)地和不同的生活史。

2.如權(quán)利要求1所述的一種判別棘頭梅童魚產(chǎn)地和生活史的方法，其特征是：所述步驟（3）中鑲樣模直徑為25mm。

3.如權(quán)利要求1所述的一種判別棘頭梅童魚產(chǎn)地和生活史的方法，其特征是：所述步驟（3）中超純水系統(tǒng)出水電阻率18.2MΩ.cm。

4.如權(quán)利要求1所述的一種判別棘頭梅童魚產(chǎn)地和生活史的方法，其特征是：所述步驟（4）中EPMA分析時的加速電壓參數(shù)為15KV，電子束電流為1.2×10^-8～2.0×10^-8A，速斑直徑為5μm，每點駐留時間為15秒，每間隔10～15?μm測量下一點。