[發(fā)明專(zhuān)利]一種判別棘頭梅童魚(yú)產(chǎn)地和生活史的方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210330300.7
• 申請(qǐng)日: 2012-09-07
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102792912A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-11-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊健;劉洪波;姜濤
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心
• 主分類(lèi)號(hào): A01K61/00
• 分類(lèi)號(hào): A01K61/00
• 代理公司: 無(wú)錫市大為專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所 32104
• 代理人: 殷紅梅

1.一種判別棘頭梅童魚(yú)產(chǎn)地和生活史的方法，其特征是：采用以下工藝步驟：

(1)、野外采集不同水域的棘頭梅童魚(yú)樣本先放入清潔的塑料自封袋中，并在0～4℃保存，在此溫度條件下盡快運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室保存；

（2）、野外采集并運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室保存的棘頭梅童魚(yú)，取體長(zhǎng)規(guī)格接近的樣本轉(zhuǎn)移于-18～-20℃冰箱內(nèi)保存，待用；

（3）、棘頭梅童魚(yú)耳石樣本前處理方法：

(3-1)、取出樣本左或右側(cè)矢耳石解凍后，經(jīng)超純水清除表面的有機(jī)質(zhì)，清洗干凈后，室溫下晾干、干燥保存作為分析的材料待用；

(3-2)、取含聚氨酯膠成分>25%的熱熔膠將耳石平滑的面固定在載玻片上，等熱熔膠冷卻10～15分鐘變硬后，先將耳石在500目水砂紙上進(jìn)行粗磨，并隨時(shí)在正置金相顯微鏡上用透反射光觀察表面狀況，待首次觀察到輪紋時(shí)換用1200目水砂紙細(xì)磨2～5分鐘使表面平滑，然后用酒精燈將熱熔膠熔化后取出耳石；

(3-3)、將未磨過(guò)的光面耳石用雙面膠將其固定在鑲樣模內(nèi)，做好樣本標(biāo)簽，將冷鑲嵌用透明的環(huán)氧樹(shù)脂和硬化劑的質(zhì)量比為5:1的比例調(diào)勻后，往每個(gè)鑲樣模內(nèi)注入3～4?ml混合樹(shù)脂溶液，將耳石包埋于其中；放入40℃～45℃的干燥箱中烘12小時(shí)～15?小時(shí)至完全固化；

(3-4)、取出鑲樣模內(nèi)包埋有耳石的固化樹(shù)脂塊，選用500目水砂紙對(duì)未磨過(guò)的光面耳石進(jìn)行粗磨，待粘在耳石上的雙面膠全部磨掉后換用1200目水砂紙進(jìn)行精磨，期間隨時(shí)在金相顯微鏡上觀察表面狀況，用透反射光確認(rèn)磨至

核心后，將樹(shù)脂塊洗凈待用；

(3-5)、使用金剛石拋光液和MD拋光布以120～150rpm的轉(zhuǎn)速在拋光機(jī)上拋光3～5分鐘至耳石表面無(wú)刮痕為止；將所有拋光的樹(shù)脂塊放入超純水環(huán)境中進(jìn)行超聲清洗3～5分鐘后，自然晾干24小時(shí)為耳石樣本；

（4）、棘頭梅童魚(yú)耳石樣本微區(qū)分析：

(4-1)、將耳石樣本置于真空鍍膜機(jī)中，在真空度達(dá)到≦2x10^-4Pa，電流達(dá)到35A～36A時(shí)，鍍碳薄膜20～25秒；

(4-2)、從耳石樣本核心順著最長(zhǎng)橫軸向邊緣用電子探針顯微分析儀進(jìn)行耳石樣本的定量線(xiàn)EPMA分析；在測(cè)Sr、Ca元素的濃度值之前先做機(jī)器狀態(tài)校驗(yàn)和標(biāo)準(zhǔn)分析，利用碳酸鈣、碳酸鍶或鈦酸鍶作為檢驗(yàn)定量測(cè)定結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)；

(4-3)、由上述電子探針顯微分析儀沿耳石樣本矢狀面所獲各點(diǎn)定量線(xiàn)分析數(shù)據(jù)用Sr和Ca含量的比率值表示；每個(gè)測(cè)定點(diǎn)到耳石核心的距離被稱(chēng)為耳石徑，統(tǒng)一使用鍶含量/鈣含量×10³的比值表示，簡(jiǎn)稱(chēng)Sr/Ca比值；耳石不同區(qū)域Sr:?Ca的含量比值數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析；差異的顯著水平判定用曼-惠特尼U測(cè)驗(yàn)進(jìn)行；根據(jù)Sr:?Ca含量比值的顯著性差異水平，區(qū)別棘頭梅童魚(yú)的產(chǎn)地和不同的生活史。

2.如權(quán)利要求1所述的一種判別棘頭梅童魚(yú)產(chǎn)地和生活史的方法，其特征是：所述步驟（3）中鑲樣模直徑為25mm。

3.如權(quán)利要求1所述的一種判別棘頭梅童魚(yú)產(chǎn)地和生活史的方法，其特征是：所述步驟（3）中超純水系統(tǒng)出水電阻率18.2MΩ.cm。

4.如權(quán)利要求1所述的一種判別棘頭梅童魚(yú)產(chǎn)地和生活史的方法，其特征是：所述步驟（4）中EPMA分析時(shí)的加速電壓參數(shù)為15KV，電子束電流為1.2×10^-8～2.0×10^-8A，速斑直徑為5μm，每點(diǎn)駐留時(shí)間為15秒，每間隔10～15?μm測(cè)量下一點(diǎn)。