[發明專利]胃腸腫瘤發病相關抑癌基因表觀突變檢測試劑盒及其用途

無效

• 申請號: 201210328782.2
• 申請日: 2012-09-06
• 公開（公告）號: CN102787174A
• 公開（公告）日: 2012-11-21
• 發明（設計）人: 范怡梅;李小薇;楊文杰;王敏;陳小鳳;吳曉梅;韓嘯;丁培成;楊白冰;王亞平
• 申請（專利權）人: 南京大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 盧亞麗

1.?一種胃腸腫瘤發病相關抑癌基因表觀突變檢測試劑盒，其特征在于包括以下成分：

（1）抑癌基因啟動子區CpG島擴增與測序引物25對；（2）PCR擴增用試劑；所述的25對引物序列如下：

第1對：MLH1基因MSP分析引物MLH1-M，用于擴增MLH1基因啟動子區CpG位點處胞嘧啶甲基化的片段

F:?5'-ATTGGTTGGATATTTCGTATTTTTC-3'??R:?5'-CCTAAAACGACTACTACCCGCT-3'

第2對：MLH1基因MSP分析引物MLH1-U，用于擴增MLH1基因啟動子區CpG位點處胞嘧啶非甲基化的片段

F:?5'-ATTGGTTGGATATTTTGTATTTTTTG-3'

R:?5'-CTCCCTAAAACAACTACTACCCACT-3'

第3對：MLH1基因BSP分析引物MLH1-BSP，用于擴增MLH1基因啟動子區CpG島并測序鑒定

F:?5'-GGTATTTTTGTTTTTATTGGTTGGATAT-3'

R:?5'-CAACTTAAATACCAATCAAATTTCTCA-3'

第4對：MSH2基因MSP分析引物MSH2-M，用于擴增MSH2基因啟動子區CpG位點處胞嘧啶甲基化的片段

F:?5'-CGGAGAAGTCGATTATTATAGTGC-3'??R:?5'-CTAAATCTTAAACACCTCCCGAA-3'

第5對：MSH2基因MSP分析引物MSH2-U，用于擴增MSH2基因啟動子區CpG位點處胞嘧啶非甲基化的片段

F:5'-TGGAGAAGTTGATTATTATAGTGTGT-3'

R:?5'-CCTAAATCTTAAACACCTCCCAAA-3'

第6對：MSH2基因BSP分析引物MSH2-BSP，用于擴增MSH2基因啟動子區CpG島并測序鑒定

F:5'-GTTTTGGAAGTTGATTGGGTGTGGT-3'??R:?5'-CCTAAATCTTAAACACCTCCC-3'

第7對：PHD3基因COBRA或BSP分析引物PHD3-BSP，用于擴增PHD3基因啟動子區CpG島并酶切鑒定或測序鑒定

F:?5'-?Ggtagtggtggtttttta-3'???R:?5'-?CATAATATATCCCAAAAACATCTC-3'

第8對：Klotho基因MSP分析引物Klotho?-M，用于擴增Klotho基因啟動子區CpG位點處胞嘧啶甲基化的片段

F:?5'-ATGAATTTGAGCGTTTACGAAAC-3'??R:?5'-ACTCCGCTAACAATAATTACCTACG-3'??

第9對：Klotho基因MSP分析引物Klotho?-U，用于擴增Klotho基因啟動子區CpG位點處胞嘧啶非甲基化的片段

F:?5'-ATGAATTTGAGTGTTTATGAAATGT-3'

R:?5'-TCCACTAACAATAATTACCTACAAA-3'

第10對：Klotho基因BSP分析引物Klotho?-BSP，用于擴增Klotho基因啟動子區CpG島并測序鑒定

F:?5'-GTTTTTTTTAGGGTATTTTT-3'???R:5'-CCCAATAATACAAAATAACCAC-3'

第11對：IGFBP7基因MSP分析引物IGFBP7-M，用于擴增IGFBP7基因啟動子區CpG位點處胞嘧啶甲基化的片段

F:?5'-AAATTAGAGGGTGGAAGAGTCGT-3'?R:?5'-CTACTAACGTCGAAAAATAAACGAA-3'??

第12對：IGFBP7基因MSP分析引物IGFBP7-U，用于擴增IGFBP7基因啟動子區CpG位點處胞嘧啶非甲基化的片段

F:?5'-AGAAATTAGAGGGTGGAAGAGTTGT-3'

R:?5'-CTACTAACATCAAAAAATAAACAAA-3'

第13對：IGFBP7基因BSP分析引物IGFBP7?-BSP，用于擴增IGFBP7基因啟動子區CpG島并測序鑒定

F:?5'-GGGGAGAAGGTTATTATTTAGGTTAGTAA-3'

R:5'-CCCTCCCATCTAACTCCTAAAATAC-3'

第14對：SFRP1基因MSP分析引物SFRP1-M，用于擴增SFRP1基因啟動子區CpG位點處胞嘧啶甲基化的片段

F:?5'-GTATTATTTGAGGTTAGGAGTTCGA-3'

R:?5'-CTAAAATACAATAACGCTATCTCCG-3'??

第15對：SFRP1基因MSP分析引物SFRP1-U，用于擴增SFRP1基因啟動子區CpG位點處胞嘧啶非甲基化的片段

F:?5'-GTATTATTTGAGGTTAGGAGTTTGA-3'

R:?5'-AAAATACAATAACACTATCTCCACT-3'

第16對：SFRP1基因BSP分析引物SFRP1?-BSP，用于擴增SFRP1基因啟動子區CpG島并測序鑒定

F:?5'-TTAGTTTGGTTAATATGGTGAAATTT-3'

R:?5'-ACAAACCCATAAAATTATAAAAACTTTTT-3'

第17對：SFRP2基因MSP分析引物SFRP2-M，用于擴增SFRP2基因啟動子區CpG位點處胞嘧啶甲基化的片段

F:?5'-CGGATTGGGGTAAAATAAGTTC-3'??R:?5'-AACTACGAAAATAAAAAACACGCA-3'??

第18對：SFRP2基因MSP分析引物SFRP2-U，用于擴增SFRP2基因啟動子區CpG位點處胞嘧啶非甲基化的片段

F:?5'-TTTGGATTGGGGTAAAATAAGTTT-3'?R:?5'-AACTACAAAAATAAAAAACACACA-3'

第19對：SFRP2基因BSP分析引物SFRP2?-BSP，用于擴增SFRP2基因啟動子區CpG島并測序鑒定

F:?5'-ATGTTTGGTAATTTAGTAGAAATTT-3'??R:?5'-ACAACAAACAAAAAAACCTAACC-3'

第20對：SFRP5基因MSP分析引物SFRP5-M，用于擴增SFRP5基因啟動子區CpG位點處胞嘧啶甲基化的片段

F:?5'-TAGGGAGTTTTGGGGAGAAAC-3'??R:?5'-AAAACGAAAAAACAATAAAAACGAC-3'??

第21對：SFRP5基因MSP分析引物SFRP5-U，用于擴增SFRP5基因啟動子區CpG位點處胞嘧啶非甲基化的片段

F:?5'-GTAGGGAGTTTTGGGGAGAAAT-3'?R:?5'-AAAACAAAAAAACAATAAAAACAAC-3'

第22對：SFRP5基因BSP分析引物SFRP5?-BSP，用于擴增SFRP5基因啟動子區CpG島并測序鑒定

F:?5'-ATGGGGTTTGGTATTAAGTTTAATG-3'?R:?5'-?ACTCCCTACCTCCCTAAACATTTT-3'

第23對：P16基因MSP分析引物P16-M，用于擴增P16基因啟動子區CpG位點處胞嘧啶甲基化的片段

F:?5'-?GGGGAGTAGTATGGAGTTTTCG-3'??R:?5’-AACTATTCGATACGTTAAACAACGC-3’??

第24對：P16基因MSP分析引物P16-U，用于擴增P16基因啟動子區CpG位點處胞嘧啶非甲基化的片段

F:?5'-GGGAGTAGTATGGAGTTTTTGG-3'??R:5'-ACTATTCAATACATTAAACAACACC-3'

第25對：P16基因BSP分析引物P16-BSP，用于擴增P16基因啟動子區CpG島并測序鑒定

F:?5'-TTTTTAGAGGATTTGAGGGATAGG-3'??R:5'-CTACCTAATTCCAATTCCCCTACA-3'。