[發明專利]轉基因玉米Bt11液相芯片檢測方法有效
| 申請號： | 201210328256.6 | 申請日： | 2012-09-06 |
| 公開（公告）號： | CN103667426A | 公開（公告）日： | 2014-03-26 |
| 發明（設計）人： | 韓雪清;梅琳;王慧煜;林祥梅 | 申請（專利權）人： | 中國檢驗檢疫科學研究院 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京路浩知識產權代理有限公司 11002 | 代理人： | 王朋飛;張慶敏 |
| 地址： | 100123 *** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 轉基因 玉米 bt11 芯片 檢測 方法 | ||
1.用于檢測轉基因玉米Bt11的引物對和探針，其特征在于，
所述引物對為：
正向引物Bt11F：5’-TATCATCGACTTCCATGACCA-3’，
反向引物Bt11R：Biotin-5’-AGCCAGTTACCTTCGGAAAA-3’；
所述探針為：NH2-C12-5’-TGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAG-3’。
2.含有權利要求1所述引物對和探針的用于檢測轉基因玉米Bt11的試劑盒。
3.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括dNTPs、Taq?DNA聚合酶、Mg2+、PCR反應緩沖液中的一種或多種。
4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括標準陽性模板。
5.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括陽性驗證探針：Biotin-5’-CTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCA-3’。
6.一種轉基因玉米Bt11液相芯片檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：
1）提取待測玉米的總DNA；
2）以步驟1）中提取的DNA為模板，以權利要求1中所述的Bt11F和Bt11R為引物，進行PCR擴增反應；
3）將PCR產物與包被有權利要求1中所述探針的微球混合孵育，反應結束后，置于液相芯片檢測儀上進行分析。
7.根據權利要求6所述的檢測方法，其特征在于，PCR反應體系以50μL計為：
8.根據權利要求6所述的檢測方法，其特征在于，PCR反應條件為：95℃預變性3min；95℃變性30s，58℃退火30s，72℃延伸30s，共35個循環；72℃延伸10min。
9.根據權利要求6-8任一項所述的檢測方法，其特征在于，步驟3）中所述微球為羧基化熒光磁性微球。
10.根據權利要求6-8任一項所述的檢測方法，其特征在于，步驟3）中混合孵育的條件為：95℃5min，58℃15min。
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