[發(fā)明專利]轉(zhuǎn)基因玉米Bt11液相芯片檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210328256.6
• 申請(qǐng)日: 2012-09-06
• 公開（公告）號(hào): CN103667426A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 韓雪清;梅琳;王慧煜;林祥梅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛;張慶敏

1.用于檢測(cè)轉(zhuǎn)基因玉米Bt11的引物對(duì)和探針，其特征在于，

所述引物對(duì)為：

正向引物Bt11F：5’-TATCATCGACTTCCATGACCA-3’，

反向引物Bt11R：Biotin-5’-AGCCAGTTACCTTCGGAAAA-3’；

所述探針為：NH₂-C₁₂-5’-TGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAG-3’。

2.含有權(quán)利要求1所述引物對(duì)和探針的用于檢測(cè)轉(zhuǎn)基因玉米Bt11的試劑盒。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括dNTPs、Taq?DNA聚合酶、Mg²⁺、PCR反應(yīng)緩沖液中的一種或多種。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括標(biāo)準(zhǔn)陽性模板。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括陽性驗(yàn)證探針：Biotin-5’-CTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCA-3’。

6.一種轉(zhuǎn)基因玉米Bt11液相芯片檢測(cè)方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）提取待測(cè)玉米的總DNA；

2）以步驟1）中提取的DNA為模板，以權(quán)利要求1中所述的Bt11F和Bt11R為引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)；

3）將PCR產(chǎn)物與包被有權(quán)利要求1中所述探針的微球混合孵育，反應(yīng)結(jié)束后，置于液相芯片檢測(cè)儀上進(jìn)行分析。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測(cè)方法，其特征在于，PCR反應(yīng)體系以50μL計(jì)為：

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測(cè)方法，其特征在于，PCR反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性3min；95℃變性30s，58℃退火30s，72℃延伸30s，共35個(gè)循環(huán)；72℃延伸10min。

9.根據(jù)權(quán)利要求6-8任一項(xiàng)所述的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟3）中所述微球?yàn)轸然療晒獯判晕⑶颉?/p>

10.根據(jù)權(quán)利要求6-8任一項(xiàng)所述的檢測(cè)方法，其特征在于，步驟3）中混合孵育的條件為：95℃5min，58℃15min。