[發(fā)明專利]一種用于ELISA診斷的生物安全性非洲豬瘟抗原多因子血清

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210328006.2
• 申請日: 2012-09-06
• 公開（公告）號: CN102967703A
• 公開（公告）日: 2013-03-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 龔振華;王志亮;路平;王麗萍;包靜月;王淑娟;李金明;單虎
• 申請（專利權(quán)）人: 中國動物衛(wèi)生與流行病學中心
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/531;C07K16/08;C07K16/06
• 代理公司: 北京科億知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種血清，尤其是用于ELISA診斷的生物安全性非洲豬瘟抗原多因子血清。

背景技術(shù)

非洲豬瘟是由非洲豬瘟病毒引起的豬的一種烈性傳染病,可以引起豬群100%發(fā)病率和死亡率，目前國內(nèi)外無有效的疫苗用于防疫這一疾病,該病被國際獸疫局列為A類動物疫病。該病主要在非洲和歐洲國家流行,并造成巨大的經(jīng)濟損失。一旦發(fā)病，只能采取封鎖、撲殺和銷毀的措施。上世紀八十年代，馬而他發(fā)生非洲豬瘟，最終導(dǎo)致其國內(nèi)當年所有生豬全部被屠宰焚燒。我國從未有過非洲豬瘟，應(yīng)當對于非洲豬瘟保持高度警惕，因為非洲豬瘟病毒的傳播速度快、傳播媒介多種多樣。尤其值得關(guān)注的是，2007年5月，格魯吉亞發(fā)生了非洲豬瘟，此后，在不到一年的時間里，非洲豬瘟傳播到了亞美尼亞、阿塞拜疆、俄羅斯等前蘇聯(lián)地區(qū)，在這一地區(qū)形成了一個新的非洲豬瘟流行區(qū)域。在當前情況下，我國應(yīng)當加強可能造成非洲豬瘟感染的所有進出境檢疫和消毒，監(jiān)控與俄羅斯接鄰地區(qū)野生動物流動，進行適當?shù)姆侵挢i瘟監(jiān)控和流行病學調(diào)查。

診斷技術(shù)對于非洲豬瘟的防疫至關(guān)重要，先進診斷技術(shù)有助于對于感染地區(qū)及其周邊地區(qū)進行監(jiān)控，嚴格控制非洲豬瘟從境外傳入，快速劃定感染區(qū)和受威脅區(qū)，進行詳細的流行病學調(diào)查。國外最常用的診斷技術(shù)是ELISA，此方法既可以檢測血清，也可檢測組織液,可用于診斷、監(jiān)測和流行病學調(diào)查。

國內(nèi)現(xiàn)無成型的非洲豬瘟血清學ELISA診斷技術(shù)產(chǎn)品，主要原因為缺少陽性對照血清，因為非洲豬瘟的血清型診斷試劑盒首先需要有陽性血清作為實驗對照。一方面，我國沒有發(fā)生過非洲豬瘟，沒有實驗室保存的非洲豬瘟病毒；另一方面，非洲豬瘟是A類動物病，目前也沒有從國外引進研究用病毒。所以國內(nèi)無法通過實驗技術(shù)生產(chǎn)非洲豬瘟的人工感染血清。到目前為止，國內(nèi)所采用的非洲豬瘟ELISA診斷試劑盒都是高價從國外購買，每份豬血清樣品的檢測花費超過200元人民幣，遠遠超過養(yǎng)殖戶甚至是研究所的使用該診斷試劑所能承受的經(jīng)濟壓力。

生物安全性非洲豬瘟抗原多因子血清徹底解決我國無法生產(chǎn)非洲豬瘟診斷試劑盒的瓶頸，目前可行的方法有兩種，一種方法是從國外高價購買陽性血清，另外一種方法是通過生物技術(shù)制備抗原，通過動物接種，技術(shù)研制具有高度生物安全性、低成本的、適合于診斷試劑開放的陽性對照血清。而第一種方法，除了要花費高成本，還要解決從國外引進非洲豬瘟陽性血清所帶來的生物安全威脅以及貿(mào)易技術(shù)壁壘的種種不利，不適于開發(fā)診斷試劑，而后者為自己創(chuàng)新方法，構(gòu)思獨特，技術(shù)嚴謹，在理論上可行，表達蛋白融合了本實驗室現(xiàn)有的基礎(chǔ)條件和優(yōu)勢，生產(chǎn)低成本診斷用陽性對照血清，則具備開發(fā)診斷試劑盒的先天條件。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的之一是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的：

采用基因表達的結(jié)構(gòu)蛋白P72、K205R、P54、A104R四種蛋白，經(jīng)過化學純化，用福氏不完全佐劑包被，分三批次肌肉免疫實驗動物豬，一個月后采集豬血，分離血清，經(jīng)過血清學檢測，分裝保存。

四種表達的結(jié)構(gòu)蛋白P72、K205R、P54、A104R蛋白氨基酸序列如下：

1、P72

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2、K205R

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3、P54

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