[發明專利]一種用于ELISA診斷的生物安全性非洲豬瘟抗原多因子血清

有效

• 申請號: 201210328006.2
• 申請日: 2012-09-06
• 公開（公告）號: CN102967703A
• 公開（公告）日: 2013-03-13
• 發明（設計）人: 龔振華;王志亮;路平;王麗萍;包靜月;王淑娟;李金明;單虎
• 申請（專利權）人: 中國動物衛生與流行病學中心
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/531;C07K16/08;C07K16/06
• 代理公司: 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

1.一種用于ELISA診斷的生物安全性非洲豬瘟抗原多因子血清,其特征在于，采用基因表達的結構蛋白P72、K205R、P54、A104R四種蛋白，經過化學純化，用福氏不完全佐劑包被，分三批次肌肉免疫實驗動物豬，一個月后采集豬血，分離血清，經過血清學檢測，分裝保存。

2.如權利要求1所述的用于ELISA診斷的生物安全性非洲豬瘟抗原多因子血清，其特征在于結構蛋白P72蛋白氨基酸序列如下：

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3.如權利要求1所述的用于ELISA診斷的生物安全性非洲豬瘟抗原多因子血清，其特征在于：結構蛋白K205R蛋白氨基酸序列如下：

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4.如權利要求1所述的用于ELISA診斷的生物安全性非洲豬瘟抗原多因子血清，其特征在于結構蛋白P54蛋白氨基酸序列如下：?

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5.如權利要求1所述的用于ELISA診斷的生物安全性非洲豬瘟抗原多因子血清，其特征在于：結構蛋白A104R蛋白氨基酸序列如下：

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6.如權利要求1所述的用于ELISA診斷的生物安全性非洲豬瘟抗原多因子血清，其特征在于：陽性血清的使用方法：

1)通過棋盤法試驗確定該陽性血清的最佳攻毒濃度;

2)將血清分裝到ELISA試劑盒中，按照常規ELISA試驗方法進行試驗。

7.如權利要求1所述的用于ELISA診斷的生物安全性非洲豬瘟抗原多因子血清，其特征在于ELISA試驗方法如下：

1)包被：抗原用0.05M?pH9．6碳酸鹽緩沖液作1：80稀釋，加入酶標板，100μl/孔，4℃包被過夜;

2)封閉：酶標板用PBST洗三次后，加入含l％BSA的PBST封?閉液進行封閉，每孔100μl，37℃濕盒內反應lh；

3)加血清：每次ELISA試驗均設立陽性對照和陰性對照，陽性對照孔加陽性血清，陰性對照孔加陰性血清。其它孔加檢測血清樣品，用血清稀釋液對血清作l:20稀釋后加入酶標板，每孔100ul，37℃濕盒內反應1h；

4)加酶標抗體：將酶標抗體(RHP一羊抗豬IgG)用PBsT作l：800稀釋后加入酶標板，每孔100UI,37℃反應1h；

5)加底物液：每孔加底物反應液100μl，37℃避光反應15rnin；6)終止反應：加入2M?H2SO4，每孔50μl，搖勻后測OD值。?