[發明專利]腎炎清片中土大黃主要成分含量的檢測方法

有效

• 申請號: 201210327760.4
• 申請日: 2012-09-06
• 公開（公告）號: CN103675111A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 周桂榮;鄂秀輝;劉艷;張蘭蘭;周水平
• 申請（專利權）人: 天士力制藥集團股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 北京君尚知識產權代理事務所(普通合伙) 11200
• 代理人: 余長江

技術領域

本發明涉及中成藥有效成分的檢測，特別涉及腎炎清片中大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的含量檢測方法。

背景技術

腎炎清片是由益母草、黃芪、白茅根、萹蓄、瞿麥、小薊、石韋、地榆炭、土大黃、甘草等制成的中藥復方制劑。方中君藥土大黃為酸模屬植物巴天酸模Rumex?patientia?L.的干燥根，從巴天酸模中發現的化合物主要包括蒽醌、萘及萘醌、黃酮、二苯乙烯苷和苯并呋喃酮等（朱晶晶，王崢濤，張朝鳳等.酸模屬植物中化學成分及其藥理活性研究進展［J］.中草藥，2008，39(3):450-454.），蒽醌類成分作為其主要活性成分目前分離得到的主要有大黃素、大黃酚、大黃素甲醚及其苷等（劉景，夏忠庭，周桂榮等.巴天酸模根化學成分研究［J］.中草藥，2011，34(6):893-895；高黎明1，魏小梅，鄭尚珍等.巴天酸模中化學成分的研究［J］.中草藥，2002，33(3):207-209.）。

目前，該藥材未被《中國藥典》收載，僅在天津、北京等地方標準中有載，但這些地方標準大多為上世紀九十年代制定，檢測手段落后，其檢測方法只停留在簡單的定性鑒別上，未收載可靠的含量測定方法，難以有效的控制藥材質量。尤其在各級藥品標準以及各文獻檢索中，對含土大黃制劑的含測控制方法未見研究，這樣不能保證含土大黃復方制劑的安全、有效。為此，結合土大黃藥材的含量測定標準建立含土大黃復方制劑的含測標準，對復方制劑的質量控制意義重大。

發明內容

本發明的目的在于提供一種簡便、快速、準確的檢測腎炎清片中土大黃主要有效成分含量的方法，為腎炎清片質量標準的制定提供依據。

本發明提供的腎炎清片中土大黃主要有效成分（大黃素、大黃酚和大黃素甲醚）含量的檢測方法，包括以下步驟：

1）以大黃素、大黃酚、大黃素甲醚為對照品，制成一定含量的大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的溶液，通過高效液相色譜法測定其圖譜，由大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的特征吸收峰峰面積和對照品進樣量繪制標準曲線；

2）將待測腎炎清片研細，加溶劑超聲處理，然后過濾取濾液，制得供試品；

3）在與步驟1）相同的色譜條件下測定步驟2）制得的供試品的高效液相色譜圖譜，并分別計算大黃素、大黃酚和大黃素甲醚相應特征吸收峰的峰面積，根據步驟1）繪制的標準曲線得到待測腎炎清片中大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的含量。

上述步驟1）優選用80-100%甲醇溶解大黃素、大黃酚和大黃素甲醚對照品，制成大黃素濃度為6-25μg/ml、大黃酚濃度為6-25μg/ml和大黃素甲醚濃度為4-16μg/ml的對照品溶液，然后上樣進行高效液相色譜。當大黃素進樣量在20.52-1026ng范圍內特征吸收峰峰面積與進樣量呈良好的線性關系；當大黃酚進樣量在17.12-856ng范圍內特征吸收峰峰面積與進樣量呈良好的線性關系；當大黃素甲醚進樣量在11.68-584ng范圍內特征吸收峰峰面積與進樣量呈良好的線性關系。

上述步驟2）腎炎清片研細后加入6-15％鹽酸溶液中，超聲使之溶散，再加入三氯甲烷，加熱回流0.5-2小時，冷卻，分液，取有機相，去除溶劑，殘渣用80-100%甲醇溶解，過濾取濾液。優選的，180mg研細的腎炎清片粉末加入10mL?8％鹽酸溶液中，超聲使之溶散，再加三氯甲烷15mL，加熱回流1小時，冷卻后分液，取三氯甲烷層（即有機相），水相（即酸液）用三氯甲烷提取3次，合并三氯甲烷液，減壓回收溶劑或水浴蒸干，殘渣加甲醇溶解，微孔濾膜（優選0.45μm）濾過，即得。

上述步驟1）和3）中，所述高效液相色譜法是反相色譜法，其色譜條件是：采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱；流動相是甲醇-(0.02~0.2％)磷酸溶液，體積比為(0.5~19):1；檢測波長為210-320nm。在此條件下，色譜峰可以得到較好的分離，理論板數按大黃素計算應不低于3000。

上述十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱優選為Agilent?SB-C₁₈柱，柱體積為4.6×250mm，粒度為5μm；流速：0.8-1.5mL/min；柱溫：25-40℃；流動相：甲醇-0.1％磷酸溶液（體積比85∶15）；檢測波長為254nm。

本發明采用反相色譜法對腎炎清片中的土大黃主要有效成分大黃素、大黃酚、大黃素甲醚的含量進行測定，所提供的色譜條件可以使得色譜峰得到較好的分離，操作簡便、靈敏度高，重現性好。并且，通過這些有效成分的含量了解腎炎清片在生產過程中是否達到生產要求，為腎炎清片質量標準的制定提供了依據。

附圖說明