[發明專利]利用SSR引物鑒定大麥品種的方法及其應用

有效

• 申請號: 201210326416.3
• 申請日: 2012-09-06
• 公開（公告）號: CN102787172A
• 公開（公告）日: 2012-11-21
• 發明（設計）人: 王艷平;沈奇;張繼紅;李華勇;吳燕;王顯生
• 申請（專利權）人: 江蘇省農業科學院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 江蘇圣典律師事務所 32237
• 代理人: 程化銘

????技術領域

????本發明涉及大麥品種鑒定方法及其應用，尤其是利用SSR引物鑒定大麥品種的方法及其應用，屬于農業的大麥育種與應用技術領域。?

????背景技術

隨著植物育種和種子產業的發展，植物新品種保護（Protection?of?New?Varieties?of?Plant，簡稱PVP）作為知識產權的10種內容之一，其重要性越來越突出。培育和推廣新的優良品種是我國大麥育種發展的重要方向，因此新品種的準確鑒定不僅是新品種審定和保護的前提，也為辨別假冒偽劣種子，保護自身知識產權，維護育種者的切身利益提供保障和科學依據。因此，開發高效、準確的種子品種鑒定方法已成為種子科研單位和企業共同關注的課題。

大麥是全球第四大禾谷類作物,適應性強、用途廣，品種的差異直接影響大麥的生產和使用性能，因此對商用種子品種的鑒別尤為重要，同時新品種的登記測試以及資源種質遺傳多樣性分析都需要有別于傳統的形態標記田間鑒定的更加高效、準確、低成本以及操作方便的分子水平品種鑒定方法。

近年來隨著分子生物學的發展，各種分子標記技術在植物品種鑒定中得到了大量應用。遺傳標記經過形態標記、細胞學標記、蛋白質標記發展到DNA標記。DNA標記是DNA水平上遺傳多態性的直接反映，表現為核苷酸序列上的差異，因此標記在數量上幾乎是無限的。與其它遺傳標記相比，DNA標記還具有無表型效應，不受環境影響等優點，廣泛應用到種質資源研究、遺傳圖譜構建、目的基因定位和分子標記輔助選擇等方面，成為理想的快速進行種子品種鑒定的檢測方法之一，其中RAPD、RFLP、AFLP、SSR及ISSR標記等在植物品種鑒定中都有應用。

目前我國對大麥品種進行鑒定主要方法是按照GB/T?19557.X-2004《植物新品種特異性、一致性和穩定性測試指南?大麥》進行田間測定來鑒定的。這種方法存在的主要問題是運用田間測定，鑒定結果易受環境因素的影響，也常出現不同測試人員對某些性狀的認識存在偏差，導致代碼判定結果不一致的問題。同時田間測定周期長，不能及時、快捷地為新品種侵權案件提供鑒定依據。測試性狀多、工作量大，無法適用大量品種的測試需求。

簡單重復序列（Simple?sequence?repeat,SSR）也叫微衛星（Microsatellites）。與其它分子標記相比，SSR標記具有多態信息含量高、共顯性遺傳、技術簡單、重復性好、特異性強等特點，已被廣泛應用于植物遺傳研究和育種實踐中。目前，SSR標記也已經應用于水稻、小麥、大麥、玉米等作物的分子連鎖圖譜構建和遺傳多樣性分析。

????發明內容

本發明的目的在于：針對目前對大麥品種進行鑒定方法只能在大田里進行，且工作量大，等一系列問題，提供一種新的利用SSR引物鑒定大麥品種的方法及其應用。

本發明的目的是這樣實現的：一種利用SSR引物鑒定大麥品種的方法，包括提取供試品種樣品的DNA、用SSR引物進行PCR擴增，對PCR擴增產物進行凝膠電泳，變性聚丙烯酰胺凝膠電泳及銀染，SSR譜帶分析，其特征在于：所述的供試品種樣品至少為兩個大麥品種，所述的SSR引物包括14對基本核心SSR引物和14對擴展核心SSR引物，其中，14對基本核心SSR引物為Bmag0211?、Bmag0378、Bmag0711、Bmac0209、Bmag0877、EBmac0701、EBmac0635、Bmag0353、Scssr10148、Scssr03907、Bmag0009、Bmag0867、HVCMA和EBmac0603對應的引物，14對擴展核心SSR引物為Scssr02748、HVM54、Scssr07759、HvXan、HVM27、HVM60、HVM40、Bmac0181、Scssr07106、Bmag0387、Bmac0018、Scssr09398、Bmac0064和Scssr15864對應的引物；具體步驟如下：

a)提取供試品種樣品的DNA；