[發(fā)明專利]α-芋螺毒素肽TxIC/Txd1、其藥物組合物及用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210325531.9
• 申請日: 2012-09-06
• 公開（公告）號: CN103665130B
• 公開（公告）日: 2016-11-02
• 發(fā)明（設計）人: 羅素蘭;長孫東亭;胡遠艷;朱曉鵬;吳勇;J·邁克爾·麥金托什
• 申請（專利權）人: 海南大學
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K7/08;C07K19/00;C07K1/06;C07K1/20;C12N15/12;C12N15/63;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12N5/10;A61K38/16;A61K38/10;A
• 代理公司: 中國國際貿(mào)易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 劉海羅

1.一種多肽，其為或者包含選自如下（1）至（3）中任一項所述的氨基酸序列：

（1）SEQ?ID?NO：5－7或SEQ?ID?NO：9所示的氨基酸序列;

（2）與上述（1）中所述的氨基酸序列至少80％、優(yōu)選至少85％、更優(yōu)選至少90％、尤其優(yōu)選至少95％、最優(yōu)選至少97％相同的氨基酸序列；或

（3）被1－5個、優(yōu)選1－3個、更優(yōu)選1－2個、最優(yōu)選1個氨基酸殘基的取代、缺失、插入和/或添加而與上述（1）或（2）所示序列有所不同的氨基酸序列。

2.根據(jù)權利要求1所述的多肽，其中，所述多肽的N末端的第一個半胱氨酸與第三個半胱氨酸形成二硫鍵，并且第二個半胱氨酸與第四個半胱氨酸形成二硫鍵;或所述多肽的N末端的第一個半胱氨酸與第四個半胱氨酸形成二硫鍵，并且第二個半胱氨酸與第三個半胱氨酸形成二硫鍵；或所述多肽的N末端的第一個半胱氨酸與第二個半胱氨酸形成二硫鍵，并且第三個半胱氨酸與第四個半胱氨酸形成二硫鍵；具體地，所述多肽的羧基末端是酰胺化的。

3.一種融合蛋白，其包含權利要求1或2所述的多肽。

4.一種多核苷酸，其編碼權利要求1或2所述多肽的氨基酸序列。

5.根據(jù)權利要求4所述的多核苷酸，其為或者包含選自如下的（1）至（3）中任一項所述的核苷酸序列：

（1）SEQ?ID?NO：1－4或SEQ?ID?NO：8或SEQ?ID?NO：10所示的核苷酸序列；

（2）上述（1）中核苷酸序列的互補序列；

（3）在嚴謹條件下能夠與上述（1）中所述核苷酸序列雜交的核苷酸序列。

6.一種核酸構(gòu)建體，其包含權利要求4或5所述的多核苷酸。

7.一種表達載體，其包含權利要求6所述的核酸構(gòu)建體。

8.一種轉(zhuǎn)化的細胞，其包含權利要求7所述的表達載體。

9.一種藥物組合物，其包含權利要求1或2所述的多肽，或者包含權利要求3所述的融合蛋白；可選地，其還包含藥學上可接受的載體或輔料。

10.一種在體內(nèi)或體外阻斷乙酰膽堿受體或者調(diào)節(jié)乙酰膽堿水平的方法，包括使用有效量的權利要求1或2所述的多肽或權利要求3所述的融合蛋白的步驟；具體地，所述乙酰膽堿受體是α3β4乙酰膽堿受體。

11.一種篩選乙酰膽堿受體抑制劑或者確定乙酰膽堿受體亞型的方法，該方法包括：通過在存在和不存在候選化合物存在的情況下將乙酰膽堿受體與權利要求1或2所述的多肽或權利要求3所述的融合蛋白進行接觸的步驟；具體地，所述乙酰膽堿受體為α3β4乙酰膽堿受體。

12.權利要求1或2所述的多肽或權利要求3所述的融合蛋白用于阻斷乙酰膽堿受體的用途；具體地，所述乙酰膽堿受體是α3β4乙酰膽堿受體。

13.權利要求1或2所述的多肽或權利要求3所述的融合蛋白在制備阻斷乙酰膽堿受體的藥物或試劑中的用途；具體地，所述乙酰膽堿受體是α3β4乙酰膽堿受體。

14.權利要求1或2所述的多肽或權利要求3所述的融合蛋白在制備治療和/或預防神經(jīng)系統(tǒng)疾病例如成癮與神經(jīng)痛，以及治療帕金森癥、癡呆、精神分裂癥、抑郁、癌癥等的藥物的用途，或者用于制備殺滅害蟲、鎮(zhèn)痛、戒煙、戒毒的藥物的用途；具體地，所述成癮由如下原因?qū)е拢焊鞣N精神活性物質(zhì)，包括尼古丁、鴉片、海洛因、甲基苯丙胺（冰毒）、嗎啡、大麻、可卡因以及國家規(guī)定管制的其他能夠使人形成癮癖的麻醉藥品和精神藥品等。具體地，所述神經(jīng)痛由如下原因?qū)е拢喊┌Y與癌癥化療、酒精中毒、坐骨神經(jīng)痛、糖尿病、三叉神經(jīng)痛、硬化癥、帶狀皰疹、機械傷和手術傷、艾滋病、頭部神經(jīng)癱瘓、藥物中毒、工業(yè)污染中毒、淋巴神經(jīng)痛、骨髓瘤、多點運動神經(jīng)痛、慢性先天性感覺神經(jīng)病、急性劇烈自發(fā)性神經(jīng)痛、擠壓神經(jīng)痛、脈管炎、血管炎、局部缺血、尿毒癥、兒童膽汁肝臟疾病、慢性呼吸障礙、復合神經(jīng)痛、多器官衰竭、膿毒病/膿血癥、肝炎、卟啉癥、維生素缺乏、慢性肝臟病、原生膽汁硬化、高血脂癥、麻瘋病、萊姆關節(jié)炎、感覺神經(jīng)束膜炎、或過敏癥。

15.權利要求1或2所述的多肽的制備方法，包括下述步驟：

1）在ABI?Prism?433a多肽合成儀上或者手工方法合成線性多肽，F(xiàn)moc氨基酸的側(cè)鏈保護基為:Pmc(Arg)、Trt(Cys)、But(Thr、Ser、Tyr)、OBut(Asp)、Boc(Lys)；半胱氨酸用Trt或Acm保護基團，分別在相應的半胱氨酸之間定點形成二硫鍵；

2）將步驟1）中得到的線性多肽從樹脂上切割下來，并用冰乙醚沉淀和洗滌回收線性多肽粗品，用制備型反向HPLC?C18柱（Vydac)純化；

3）將步驟2）中得到的產(chǎn)物進行兩步氧化折疊。