[發明專利]煙葉、葫蘆巴、甜椒、西紅柿復合發酵香料及其在重組煙葉中的應用

無效

• 申請號: 201210324866.9
• 申請日: 2012-09-05
• 公開（公告）號: CN102864103A
• 公開（公告）日: 2013-01-09
• 發明（設計）人: 羅誠浩;魏敏;陳義坤;宋旭艷;李冉
• 申請（專利權）人: 湖北中煙工業有限責任公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A24B15/28;C12R1/01
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司 42104
• 代理人: 馬輝

1.一種植生拉烏爾菌，該菌株名為Raoultella?planticola?VP4-4，保藏號為CCTCC?M?2012005，植生拉烏爾菌Raoultella?planticola?VP4-4?CCTCC?M?2012005的生物學特征是：革蘭氏陰性菌，能產酸、使牛奶液化并生成吲哚產生、賴氨酸脫羧酶實驗呈陽性；鳥氨酸脫羧酶實驗、H2S產生、明膠液化呈陰性；能以單糖，多糖、酯類和氨基酸為唯一碳源生長，其16SrRNA序列全長1408bp，其16S?rRNA序列與Raoultella?planticola的相似度達到99.563%。?

2.一種煙葉、葫蘆巴、甜椒、西紅柿復合發酵香料的制備方法，包括以下步驟：

1）煙葉提取液的制備：將煙葉粉碎至50~100目，再將煙末和水按質量比1∶30~50混合，回流提取1~3h后過濾，重復1~3次回流提取濾液，合并濾液，即得煙葉提取液，并滅菌備用；

2）葫蘆巴提取液的制備：將葫蘆巴粉與水按質量比1∶20~40混合，磁力攪拌、回流提取1~3h后過濾，重復回流提取1~3次，過濾后合并濾液，即得葫蘆巴提取液，并滅菌備用；

3）西紅柿、甜椒混合提取液的制備：將西紅柿、甜椒切片，按質量比1∶0.5~2混合，再與水按質量比1∶20~40混合，回流提取1~3h過濾，重復1~3次回流提取濾液，合并濾液，即得西紅柿、甜椒混合提取液，并滅菌備用；

4）將步驟1）、步驟2）和步驟3）中得到的煙葉提取液、葫蘆巴提取液和西紅柿、甜椒混合提取液按1∶0.5~1∶0.5~1的體積比進行混合，即得煙葉、葫蘆巴、甜椒、西紅柿混合提取液；

5）菌種活化：將植生拉烏爾菌?Raoultella?planticola?VP4-4?CCTCC?M?2012005接種到斜面培養基上，在25~38℃，靜置培養24~72h后得到活化菌種，置于冰箱中；

6）制備種子培養液：將步驟5）中所得的斜面培養物，接種到種子培養基，在25~38℃條件下，100~150r/min振蕩培養24h~72h，連續轉接1~3次，制得種子培養液；

7）發酵：將種子培養液按體積比10~20%接種到上述步驟4）中的滅菌的煙葉、葫蘆巴、甜椒、西紅柿混合提取液，接種后的濾液的裝罐量為30~40%，pH5~8，溫度30~38℃，轉速150~200r/min，不避光條件下發酵3~8天，得到發酵液；

8）將發酵液和95%乙醇按體積比1∶3~6，沉淀過夜，5000~10000r/min離心10~20min，過濾后減壓濃縮至相對密度為1.0859~1.1241的浸膏，即得煙葉、葫蘆巴、甜椒、西紅柿提取物復合發酵浸膏。

3.根據權利要求2所述的一種煙葉、葫蘆巴、甜椒、西紅柿復合發酵香料的制備方法，其特征在于：所述步驟5）中，所述斜面培養基為：麥芽糖120mL，蔗糖20g/L，瓊脂15g/L。

4.根據權利要求2所述的一種煙葉、葫蘆巴、甜椒、西紅柿復合發酵香料的制備方法，其特征在于：所述步驟6）中，所述種子液培養基組成為：木糖醇：50g/L，黃豆餅粉：10g/L，氯化鈉5g/L。

5.一種根據權利要求2所得煙葉、葫蘆巴、甜椒、西紅柿復合發酵香料的應用，其特征在于：所述煙葉、葫蘆巴、甜椒、西紅柿復合發酵香料作為天然煙草添加劑加入重組煙葉中，加入重組煙葉中該天然復合發酵香料的質量比為0.1~0.3%。