[發(fā)明專利]一種降低刺激的發(fā)酵煙葉提取物的制備方法及其在重組煙葉中的應(yīng)用

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210324789.7
• 申請(qǐng)日: 2012-09-05
• 公開（公告）號(hào): CN102851241A
• 公開（公告）日: 2013-01-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 魏敏;陳義坤;羅誠浩;李冉;宋旭艷
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 湖北中煙工業(yè)有限責(zé)任公司
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;A24B15/20;A24B15/28;C12R1/01
• 代理公司: 武漢開元知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 42104
• 代理人: 馬輝

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及重組煙葉添加劑技術(shù)領(lǐng)域，具體是指一種降低刺激的發(fā)酵煙葉提取物的制備方法及其在重組煙葉中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

重組煙葉又稱再造煙葉或均質(zhì)煙葉，主要由煙末、碎片、煙梗或低次煙葉加入膠粘劑和其他添加劑等組成。國內(nèi)現(xiàn)有的造紙法薄片生產(chǎn)工藝將煙葉和煙梗中的水溶性物質(zhì)用水萃取，經(jīng)固液分離后，固體部分經(jīng)制漿后再制成紙基，而液體部分則濃縮后回涂到紙基上。這種生產(chǎn)工藝在很大程度上只是一個(gè)原材料的物理重組過程。就其化學(xué)組成而言，用該方法所得到的重組煙葉與作為原料的煙葉、煙梗差別不大。這樣導(dǎo)致重組煙葉存在雜氣重、刺激性大和口感不適等吸味缺陷，影響了重組煙葉在卷煙產(chǎn)品中的使用效果和添加量。國內(nèi)通常的做法是采用加料的辦法來改善部分不足之處，其中也采用煙草類提取物作為添加劑對(duì)重組煙葉進(jìn)行加香加料，但是這種傳統(tǒng)的化學(xué)方法對(duì)重組煙葉質(zhì)量的改善程度非常有限，難以解決重組煙葉質(zhì)量的一些深層次的問題。針對(duì)這一現(xiàn)象，改善重組煙葉的質(zhì)量和使用價(jià)值已經(jīng)成為這一領(lǐng)域的重大課題之一。

煙用較多的煙草類提取物一般采用傳統(tǒng)方法制得，即采用單體煙葉或復(fù)配的葉組為原料通過水、醇提取或分子蒸餾得到，這樣提取的煙草類提取物香氣特征較弱，添加后對(duì)卷煙的改善有一定局限。采用微生物菌株發(fā)酵煙草提取物生產(chǎn)重組煙葉用天然生物香料，還未見報(bào)道。

微生物在增殖過程中可產(chǎn)生龐大的高活性酶系，如多糖水解酶類、蛋白酶類、酯化酶類、氧化還原酶類及裂合酶類等，在酶促作用、化學(xué)作用及微生物體內(nèi)復(fù)雜代謝的協(xié)同作用下，以煙葉為原料發(fā)生分解、降解、氧化、還原、聚合、偶聯(lián)、轉(zhuǎn)化等作用，形成復(fù)雜的低分子化合物，其中包括各種香味化合物，如醇類、醛類、酮類、酸類、脂類、酚類、吡喃類、吡啶類和萜烯類等，這些香氣物質(zhì)是煙草或用于煙草的添加劑的香氣組分，對(duì)重組煙葉的煙香進(jìn)行特征強(qiáng)化、改善口感。采用微生物發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)煙用香料，天然綠色環(huán)保無害，工藝過程簡(jiǎn)單易操作，不產(chǎn)生有毒副產(chǎn)品、無污染等。現(xiàn)有技術(shù)中，利用植生拉烏爾菌對(duì)刺激的煙葉提取物進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化生產(chǎn)煙用香料的方法未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明針對(duì)目前重組煙葉存在雜氣重、刺激性大和口感不適等吸味缺陷，提供了一種降低刺激的發(fā)酵煙葉提取物的制備方法及其在重組煙葉中的應(yīng)用。本發(fā)明制成的由植生拉烏爾菌生物轉(zhuǎn)化生成降低煙氣刺激的發(fā)酵煙葉提取物，改善了重組煙葉刺激大、口感不適的吸味缺陷，能與其它煙用香精香料混合調(diào)配使用。

本發(fā)明提供一種植生拉烏爾菌，該菌株名為Raoultella?planticola?VP4-4，于2012年1月11日保藏于武漢大學(xué)中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號(hào)為CCTCC?M?2012005，植生拉烏爾菌Raoultella?planticola?VP4-4?CCTCC?M?2012005的生物學(xué)特征是：革蘭氏陰性菌，能產(chǎn)酸、使牛奶液化并生成吲哚產(chǎn)生、賴氨酸脫羧酶實(shí)驗(yàn)呈陽性；鳥氨酸脫羧酶實(shí)驗(yàn)、H2S產(chǎn)生、明膠液化呈陰性；能以單糖，多糖、酯類和氨基酸為唯一碳源生長，

所述植生拉烏爾菌Raoultella?planticola?VP4-4的分子鑒定特征為：其16SrRNA序列全長1408bp，16S?rRNA序列與Raoultella?planticola的相似度達(dá)到99.563%。

本發(fā)明提供一種降低刺激的發(fā)酵煙葉提取物的制備方法，它包括以下步驟：

1）將煙葉粉碎至50~100目，再將煙末和水按質(zhì)量比1∶20~60回流提取1~3h后過濾，重復(fù)1~3次回流提取濾液，合并濾液，即得煙葉提取液，并滅菌；

2）菌種活化：將植生拉烏爾菌?Raoultella?planticola?VP4-4?CCTCC?M?2012005接種到斜面培養(yǎng)基上，在25~38℃，靜置培養(yǎng)24~72h后得到活化菌種，置于冰箱中；

3）制備種子培養(yǎng)液：將步驟2）中所得的活化菌種，接種到種子培養(yǎng)基，在25~38℃條件下，100~150r/min振蕩培養(yǎng)24h~72h，連續(xù)轉(zhuǎn)接1~3次，制得種子培養(yǎng)液；

4）發(fā)酵：將種子培養(yǎng)液按體積比2~20%接種到上述步驟1）中的滅菌的煙葉提取液，接種后的煙葉提取液的裝罐量為20~40%，pH5~8，溫度30~40℃，轉(zhuǎn)速100~200r/min，不避光條件下發(fā)酵3~7天，得到發(fā)酵液；

5）將發(fā)酵液和95%乙醇按體積比1∶2~6，沉淀過夜，4000~10000r/min離心10~30min，過濾后減壓濃縮至相對(duì)密度為1.0112~1.0633的浸膏，即得降低刺激的發(fā)酵煙葉提取物。