[發(fā)明專利]一種降低刺激的發(fā)酵煙葉提取物的制備方法及其在重組煙葉中的應用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210324789.7
• 申請日: 2012-09-05
• 公開（公告）號: CN102851241A
• 公開（公告）日: 2013-01-02
• 發(fā)明（設計）人: 魏敏;陳義坤;羅誠浩;李冉;宋旭艷
• 申請（專利權）人: 湖北中煙工業(yè)有限責任公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A24B15/20;A24B15/28;C12R1/01
• 代理公司: 武漢開元知識產(chǎn)權代理有限公司 42104
• 代理人: 馬輝

1.一種植生拉烏爾菌，該菌株名為Raoultella?planticola?VP4-4，保藏號為CCTCC?M?2012005，植生拉烏爾菌Raoultella?planticola?VP4-4?CCTCC?M?2012005的生物學特征是：革蘭氏陰性菌，能產(chǎn)酸、使牛奶液化并生成吲哚產(chǎn)生、賴氨酸脫羧酶實驗呈陽性；鳥氨酸脫羧酶實驗、H2S產(chǎn)生、明膠液化呈陰性；能以單糖，多糖、酯類和氨基酸為唯一碳源生長，其16S?rRNA序列全長1408bp，其16S?rRNA序列與Raoultella?planticola的相似度達到99.563%。

2.一種降低刺激的發(fā)酵煙葉提取物的制備方法，包括以下步驟：

1）將煙葉粉碎至50~100目，再將煙末和水按質(zhì)量比1∶20~60回流提取1~3h后過濾，重復1~3次回流提取濾液，合并濾液，即得煙葉提取液，并滅菌；

2）菌種活化：將植生拉烏爾菌?Raoultella?planticola?VP4-4?CCTCC?M?2012005接種到斜面培養(yǎng)基上，在25~38℃，靜置培養(yǎng)24~72h后得到活化菌種，置于冰箱中；

3）制備種子培養(yǎng)液：將步驟2）中所得的活化菌種，接種到種子培養(yǎng)基，在25~38℃條件下，100~150r/min振蕩培養(yǎng)24h~72h，連續(xù)轉接1~3次，制得種子培養(yǎng)液；

4）發(fā)酵：將種子培養(yǎng)液按體積比2~20%接種到上述步驟1）中的滅菌的煙葉提取液，接種后的煙葉提取液的裝罐量為20~40%，pH5~8，溫度30~40℃，轉速100~200r/min，不避光條件下發(fā)酵3~7天，得到發(fā)酵液；

5）將發(fā)酵液和95%乙醇按體積比1∶2~6，沉淀過夜，4000~10000r/min離心10~30min，減壓濃縮，過濾后減壓濃縮至相對密度為1.0112~1.0633的浸膏，即得降低刺激的發(fā)酵煙葉提取物。

3.根據(jù)權利要求2所述的一種降低刺激的發(fā)酵煙葉提取物的制備方法，其特征在于：所述步驟2）中，所述斜面培養(yǎng)基為：麥芽汁：120mL，

蔗糖：20g/L，瓊脂：15g/L。

4.根據(jù)權利要求2所述的一種降低刺激的發(fā)酵煙葉提取物的制備方法，其特征在于：所述步驟3）中，所述種子液培養(yǎng)基組成為：麥芽糖：50g/L，蛋白胨：10g/L，氯化鈉：5g/L。

5.一種根據(jù)權利要求2所得降低刺激的發(fā)酵煙葉提取物的應用，其特征在于：所述降低刺激的發(fā)酵煙葉提取物浸膏加入卷煙中，加入卷煙中煙用發(fā)酵煙葉提取物的質(zhì)量比為0.05~0.15%。