[發明專利]高增殖能力、高細胞毒活性、高存活率的CIK細胞制備方法、相關CIK細胞及應用

有效

• 申請號: 201210324368.4
• 申請日: 2012-09-04
• 公開（公告）號: CN102827809A
• 公開（公告）日: 2012-12-19
• 發明（設計）人: 凌丹彥;戴書縉
• 申請（專利權）人: 上海易美生物技術有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783;C12N5/0786;A61K35/14;A61P35/00;A61P31/00;A61P37/02
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 王潔;鄭暄

技術領域

本發明涉及生命科學與醫學的交叉技術領域，特別涉及強化的免疫細胞，即細胞因子誘導的殺傷細胞（Cytokine-Induced?Killer?Cell,CIK）技術領域，具體是指一種高增殖能力、高細胞毒活性、高存活率的CIK細胞制備方法、相關CIK細胞及應用。

背景技術

隨著腫瘤對人類生存健康的威脅日益嚴重，應對腫瘤的治療模式也發生著日新月異的變化，各種腫瘤治療的新藥物、新技術、新方法層出不窮，其中各種腫瘤的免疫細胞治療非常活躍，成為腫瘤生物治療中重要的發展方向。

腫瘤的過繼性細胞免疫治療（Adoptive?Cellular?Immunotherapy，ACI或AIT）是指向腫瘤患者轉輸具有抗腫瘤活性的免疫細胞（特異性和非特異性的）直接殺傷腫瘤或激發機體的免疫應答殺腫瘤細胞，可作為手術、放療、化療的補充，以提高療效和改善患者的生存質量。因此，近年來它一直是腫瘤生物治療中最活躍的領域。

國內外在臨床應用的自體免疫細胞治療腫瘤，主要是細胞因子誘導的殺傷細胞（Cytokine-Induced?Killer?Cell,CIK）、樹突狀細胞（Dendritic?Cell,DC）、自然殺傷細胞（Natural?Killer?Cell,NK）及γδT細胞，其他T細胞（CTL、CD3AK、DNT）也有臨床應用。國內進行自體免疫細胞治療最早在1996年開始，主要是LAK細胞。近五年主要開展的是CIK、DC細胞治療。細胞因子誘導的殺傷細胞(CIK)是通過優化培養體系而獲得增殖能力更強的異質性細胞群體。

國內外多年的臨床研究表明，CIK細胞治療可以提高患者無病生存期和總生存期，提高機體抗腫瘤免疫功能，改善患者生活質量。目前，在美國國立衛生研究院（National?Institutes?of?Health,NIH）官方臨床試驗網登記并正在進行的CIK細胞、NK細胞相關臨床試驗均達數百項之多，其中大約90％的臨床試驗與腫瘤治療相關，而各種T細胞的抗腫瘤臨床試驗更是達到了上千項之多。歐盟與美國還先后分別于2010年和2011年批準了一個通過提高T細胞免疫活性的單克隆抗體易普利姆瑪（Ipilimumab/Yervoy）用于晚期黑色素瘤的治療。

CIK細胞是將人體外周血單個核細胞(Peripheral?Blood?Mononuclear?Cell,PBMC)在體外用多種細胞因子共同培養而獲得的一群異質性細胞，其中CD3⁺CD56⁺雙陽性細胞為其主要效應細胞，具有增殖速度快、殺瘤活性高、殺瘤譜廣、非主要組織相容性復合體（Major?Histocompatibility?Complex,MHC）限制性、對正常骨髓造血影響輕微等優點。特別是對于術后清除微小轉移灶、防止癌的擴散和復發、提高患者自身抗腫瘤免疫能力有重要作用。對于無法手術或對化療耐受的中晚期腫瘤患者也可起到改善生活質量、延長生命的積極作用。CD3⁺CD56⁺雙陽性細胞在正常人體外周血組分中僅占3%左右，體外在含多種細胞因子的培養基中擴增，可使CD3⁺CD56⁺雙陽性細胞數量擴增1000倍以上。

目前CIK細胞的傳統制備方法是將分離得到的外周血單個核細胞用干擾素-γ刺激24小時后，再用CD3單抗、IL-1α、IL-2等因子進行刺激。這樣得到的CIK細胞中CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺的T細胞含量低、細胞活力和腫瘤殺傷能力低，對腫瘤的治療效果十分有限。另一方面，對現有CIK細胞制備方法的統計表明，有10%左右的例/次，無法從外周血單個核細胞擴增出CIK細胞，擴增過程中細胞數量沒有顯著增長。

因此，需要提供一種腫瘤殺傷細胞-CIK細胞的制備方法，其中CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺的T細胞含量高、細胞活力和腫瘤殺傷能力高，對腫瘤的治療效果好。

發明內容

本發明的目的是克服了上述現有技術中的缺點，提供一種高增殖能力、高細胞毒活性、高存活率的CIK細胞制備方法、相關CIK細胞及應用，該CIK細胞的制備方法設計巧妙，制備得到的腫瘤殺傷細胞-CIK細胞具有較強的增殖能力，較高的毒活性，具有更佳的腫瘤殺傷效率，提高臨床療效，適于大規模推廣應用。