[發明專利]用實時熒光定量PCR檢測NAT2基因多態性的試劑盒及方法

無效

• 申請號: 201210323380.3
• 申請日: 2012-09-04
• 公開（公告）號: CN102876775A
• 公開（公告）日: 2013-01-16
• 發明（設計）人: 駱子義;鄔宇美
• 申請（專利權）人: 駱子義;鄔宇美
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 深圳鼎合誠知識產權代理有限公司 44281
• 代理人: 向武橋

1.一種用實時熒光定量PCR檢測NAT2基因多態性的試劑盒，其特征在于，包括盒體、探針組及具有聚合酶的PCR反應液，所述探針組由用于檢測NAT2基因的第341位堿基突變的341探針、用于檢測NAT2基因的第481位堿基突變的481探針、用于檢測NAT2基因的第590位堿基突變的590探針和用于檢測NAT2基因的第857位堿基突變的857探針中的一個或多個組成，所述341、481、590、857探針均包括上游引物、下游引物、野生型探針及突變型探針，且：

所述341探針的上游引物如SEQ?ID?NO:2~SEQ?ID?NO:6中之一所示，其下游引物如SEQ?ID?NO:7~SEQ?ID?NO:17中之一所示，其野生型探針如SEQ?ID?NO:18~SEQ?ID?NO:22中之一所示，其突變型探針如SEQ?ID?NO:23~SEQ?ID?NO:27中之一所示；

所述481探針的上游引物如SEQ?ID?NO:28~SEQ?ID?NO:36中之一所示，其下游引物如SEQ?ID?NO:37~SEQ?ID?NO:40中之一所示，其野生型探針如SEQ?ID?NO:41~SEQ?ID?NO:47中之一所示，其突變型探針如SEQ?ID?NO:48~SEQ?ID?NO:54中之一所示；

所述590探針的上游引物如SEQ?ID?NO:55~SEQ?ID?NO:63中之一所示，其下游引物如SEQ?ID?NO:64~SEQ?ID?NO:67中之一所示，其野生型探針如SEQ?ID?NO:68~SEQ?ID?NO:72中之一所示，其突變型探針如SEQ?ID?NO:73~SEQ?ID?NO:77中之一所示；

所述857探針的上游引物如SEQ?ID?NO:78~SEQ?ID?NO:82中之一所示，其下游引物如SEQ?ID?NO:83~SEQ?ID?NO:92中之一所示，其野生型探針如SEQ?ID?NO:93~SEQ?ID?NO:96中之一所示，其突變型探針如SEQ?ID?NO:97~SEQ?ID?NO:100中之一所示。

2.如權利要求1所述的用實時熒光定量PCR檢測NAT2基因多態性的試劑盒，其特征在于，所述探針組由341、481、590和857探針中的多個組成。

3.如權利要求1所述的用實時熒光定量PCR檢測NAT2基因多態性的試劑盒，其特征在于，所述聚合酶為Taq酶。

4.如權利要求1-3中任意一項所述的用實時熒光定量PCR檢測NAT2基因多態性的試劑盒，其特征在于，各所述野生型探針和突變型探針的5’端均以熒光報告基團標記，所述熒光報告基團選擇CY5、ROX、FAM、HEX中之一標記，且所述野生型探針的標記與所述突變型探針的標記相異。

5.一種用實時熒光定量PCR檢測NAT2基因多態性的方法，其特征在于，包括如下步驟：

a)以人DNA試樣為模板，加入PCR反應液；

b)在所述PCR反應液中，加入探針組，所述探針組由用于檢測NAT2基因的第341位堿基突變的341探針、用于檢測NAT2基因的第481位堿基突變的481探針、用于檢測NAT2基因的第590位堿基突變的590探針和用于檢測NAT2基因的第857位堿基突變的857探針中的一個或多個組成，所述341、481、590、857探針均包括上游引物、下游引物、野生型探針及突變型探針；

c)設定PCR反應條件，根據探針熒光標記選擇對應探針檢測通道的顏色；

d)根據熒光擴增曲線顏色判斷擴增產物是純和野生型、純和突變型還是雜合型。