[發明專利]用實時熒光定量PCR檢測NAT2基因多態性的試劑盒及方法

無效

• 申請號: 201210323380.3
• 申請日: 2012-09-04
• 公開（公告）號: CN102876775A
• 公開（公告）日: 2013-01-16
• 發明（設計）人: 駱子義;鄔宇美
• 申請（專利權）人: 駱子義;鄔宇美
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 深圳鼎合誠知識產權代理有限公司 44281
• 代理人: 向武橋

技術領域

本發明涉及一種用于檢測基因多態性的試劑盒及方法。

背景技術

結核病是嚴重危害人類健康的慢性傳染病。近10余年來，由于艾滋病的流行、移民和流動人口的增加、多種耐藥結核菌的增多，以及不少國家和地區對結核病控制的忽視等因素，全球結核病形勢急劇惡化，無論發達國家或發展中國家，結核病病人數都在增加。在世界衛生組織推薦的標準抗結核化療方案中,異煙肼、利福平、吡嗪酰胺是不可替代的一線抗結核藥，這些藥物對肝臟有一定毒性。藥物性肝損害是抗結核藥物最常見的毒副作用之一，也是結核患者停止化療的最常見原因之一。抗結核藥物性肝損害尤其是異煙肼所致肝損害已屢見不鮮，重癥肝炎的亦不少見，甚至產生致命后果。對于出現藥物性肝損害的結核患者是選擇繼續治療還是停用抗結核藥是個兩難選擇。

異煙肼在肝內通過N-乙酰化酶代謝為乙酰化異煙肼及毒性較強的乙酰肼和異煙酸，導致肝細胞變性和壞死；代謝過程中生成低分子自由基，也可誘導脂質過氧化反應，引起藥物性肝炎。大量研究表明慢乙酰化型患者使用異煙肼時更容易出現較重肝損害。因此檢測NAT2基因，對其進行分型不僅可以預測結核患者發生肝損害的風險，同時可以為個體化藥物治療提供指導。

目前檢測基因多態性的方法很多，最常用的PCR-RFLP法，另外還有反向點雜交法、等位基因特異性聚合酶鏈反應、直接測序法等。后者是所有方法的金標準，但由于其費用昂貴，未廣泛使用。而PCR-RFLP法雖然費用較低，操作簡單，但特異性和敏感性都不太理想，且檢測時間較長。

發明內容

本發明提供一種能夠有效減少時間和成本的用于檢測NAT2基因多態性的試劑盒及方法。

本發明提供一種用實時熒光定量PCR檢測NAT2基因多態性的試劑盒，包括盒體、探針組及具有聚合酶的PCR反應液，所述探針組由用于檢測NAT2基因的第341位堿基突變的341探針、用于檢測NAT2基因的第481位堿基突變的481探針、用于檢測NAT2基因的第590位堿基突變的590探針和用于檢測NAT2基因的第857位堿基突變的857探針中的一個或多個組成，所述341、481、590、857探針均包括上游引物、下游引物、野生型探針及突變型探針，且：所述341探針的上游引物如SEQ?ID?NO:2~SEQ?ID?NO:6中之一所示，其下游引物如SEQ?ID?NO:7~SEQ?ID?NO:17中之一所示，其野生型探針如SEQ?ID?NO:18~SEQ?ID?NO:22中之一所示，其突變型探針如SEQ?ID?NO:23~SEQ?ID?NO:27中之一所示；所述481探針的上游引物如SEQ?ID?NO:28~SEQ?ID?NO:36中之一所示，其下游引物如SEQ?ID?NO:37~SEQ?ID?NO:40中之一所示，其野生型探針如SEQ?ID?NO:41~SEQ?ID?NO:47中之一所示，其突變型探針如SEQ?ID?NO:48~SEQ?ID?NO:54中之一所示；所述590探針的上游引物如SEQ?ID?NO:55~SEQ?ID?NO:63中之一所示，其下游引物如SEQ?ID?NO:64~SEQ?ID?NO:67中之一所示，其野生型探針如SEQ?ID?NO:68~SEQ?ID?NO:72中之一所示，其突變型探針如SEQ?ID?NO:73~SEQ?ID?NO:77中之一所示；所述857探針的上游引物如SEQ?ID?NO:78~SEQ?ID?NO:82中之一所示，其下游引物如SEQ?ID?NO:83~SEQ?ID?NO:92中之一所示，其野生型探針如SEQ?ID?NO:93~SEQ?ID?NO:96中之一所示，其突變型探針如SEQ?ID?NO:97~SEQ?ID?NO:100中之一所示。

所述探針組由341、481、590和857探針中的多個組成。

所述探針組由341探針和857探針組成。

所述探針組由481探針和590探針組成。

檢測時，用實時熒光定量PCR法檢測NAT2基因的試劑盒，其含有上述本發明的NAT2基因檢測用探針組。

檢測時，用實時熒光定量PCR法檢測NAT2基因的多態性方法，包含下述（a）工序：以試樣中的DNA為模板，使用本發明的NAT2基因檢測用探針對，在反應液中檢測上述NAT2基因的工序。

一種多態性解析方法，其為解析NAT2中4個檢測突變位點的多態性方法，包括下述(A)～(D)工序：