[發(fā)明專利]一種從菝葜中提取高純度抗腫瘤物質(zhì)氧化白藜蘆醇的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210322859.5
• 申請日: 2012-09-04
• 公開（公告）號: CN102795971A
• 公開（公告）日: 2012-11-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉永俊;劉曉娜;王繼鵬
• 申請（專利權(quán)）人: 煙臺渤海制藥集團(tuán)有限公司
• 主分類號: C07C39/21
• 分類號: C07C39/21;C07C37/68
• 代理公司: 煙臺雙聯(lián)專利事務(wù)所(普通合伙) 37225
• 代理人: 梁翠榮

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，特別涉及一種從菝葜中提取高純度抗腫瘤物質(zhì)氧化白藜蘆醇的方法。

背景技術(shù)

氧化白藜蘆醇化學(xué)名為2,4,3',5'-四羥基茋，熔點為203～207℃，外觀為黃色結(jié)晶體，比紅酒活性物質(zhì)白藜蘆醇多一個酚羥基，具有更高的抗氧化活性。此外還具有：抗炎、抗血栓、防癌、抗癌、抗高血脂癥、抗菌等多方面的活性。

氧化白藜蘆醇在自然界中含量很少，目前僅發(fā)現(xiàn)在桑白皮、菝葜等植物中含量較高，其化學(xué)合成工藝復(fù)雜且產(chǎn)率很低。

專利號為200910104202的發(fā)明公開了一種從桑白皮中提取氧化白藜蘆醇的方法，該方法工藝簡單，但所得產(chǎn)物純度較低，無法應(yīng)用于許多分析實驗和精密配制。且由于該提取方法一開始便扔掉了酶解后有效成分遠(yuǎn)未提取完全的濾渣，只利用了濾液，所以提取率較低，每噸桑白皮只能提取到150~200克氧化白藜蘆醇，成本過于昂貴。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在提供一套從菝葜中提取高純度抗腫瘤物質(zhì)氧化白藜蘆醇的方法，通過設(shè)計篩選成熟的工藝步驟和工藝參數(shù)，以得到高產(chǎn)率、高純度的氧化白藜蘆醇。

為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

一種從菝葜中提取高純度抗腫瘤物質(zhì)氧化白藜蘆醇的方法，其特征在于，依次通過下列步驟實現(xiàn)：

1）取菝葜粉碎成40目粗粉；配置ph值為6.5，酶濃度為5g/L的纖維素酶酶解液；取菝葜質(zhì)量數(shù)與酶解液體積數(shù)之比為1：20，酶解溫度為40-45℃，酶解8小時；

2）將酶解后的菝葜濾出，與85%的乙醇混合成懸浮物，加熱至50℃，施壓30MPa，采用CO₂超臨界流體以10kg/h的速度進(jìn)行萃取；控制分離壓力5.5?MPa，對CO₂流體與萃取物進(jìn)行減壓分離；得總產(chǎn)物；

3）將總產(chǎn)物加入熱水至溶解，溶液通過AB-8大孔吸附樹脂；先用水洗去雜質(zhì)，再用6倍柱體積的75%乙醇以6倍柱體積/小時洗脫目標(biāo)產(chǎn)物；洗脫液采用負(fù)壓成膜濃縮，干燥，得粗品A；

4）將粗品A進(jìn)行硅膠柱層析，工藝條件為：采用100目硅膠，粗品A與硅膠質(zhì)量比：1：50，采用氯仿-甲醇體積比5：1的洗脫劑，洗脫流速為0.5倍柱體積/小時，洗脫體積為30倍量柱體積；濃縮洗脫液，干燥，得粗品B；

5）將粗品B進(jìn)行葡聚糖凝膠Sephadex?LH-20純化，純化條件：粗品B與Sephadex?LH-20質(zhì)量比為?1：100，采用正己烷-二氯甲烷-甲醇體積比為10：15：75的溶劑洗脫體系，洗脫流速0.3mL／min，洗脫體積為3倍量柱體積；濃縮洗脫液，干燥，得粗品C；

6）將粗品C進(jìn)行C18反相硅膠純化，純化條件：粗品C與C18反相硅膠質(zhì)量比為1：100，采用甲醇-水體積比為35：65溶劑洗脫體系，洗脫流速15ml/小時，洗脫體積為5倍量柱體積；濃縮，干燥，即得高純度氧化白藜蘆醇。

本方明的有益效果：

1、本發(fā)明采用一定參數(shù)超臨界萃取酶解后的菝葜，使得氧化白藜蘆醇的產(chǎn)率大大提高，平均每噸菝葜藥材得終產(chǎn)物達(dá)1.12~2.35千克。

2、本發(fā)明最終所制得的氧化白藜蘆醇純度可達(dá)99.8%，質(zhì)量更穩(wěn)定，能夠應(yīng)用于許多分析實驗和精密配制。

3、本發(fā)明整套工藝成熟、穩(wěn)定，適于工業(yè)化大生產(chǎn)。

具體實施方式

為了更好地理解和實施本發(fā)明，下面結(jié)合具體實施例進(jìn)一步說明本發(fā)明。

具體實施例1

一種從菝葜中提取高純度抗腫瘤物質(zhì)氧化白藜蘆醇的方法，依次通過下列步驟實現(xiàn)：

1）取菝葜粉碎成40目粗粉；配置ph值為6.5，酶濃度為5g/L的纖維素酶酶解液；取菝葜質(zhì)量數(shù)與酶解液體積數(shù)之比為1：20，酶解溫度為40-45℃，酶解8小時；

2）將酶解后的菝葜濾出，與85%的乙醇混合成懸浮物，加熱至50℃，施壓30MPa，采用CO₂超臨界流體以10kg/h的速度進(jìn)行萃取；控制分離壓力5.5?MPa，對CO₂流體與萃取物進(jìn)行減壓分離；得總產(chǎn)物；

3）將總產(chǎn)物加入熱水至溶解，溶液通過AB-8大孔吸附樹脂；先用水洗去雜質(zhì)，再用6倍柱體積的75%乙醇以6倍柱體積/小時洗脫目標(biāo)產(chǎn)物；洗脫液采用負(fù)壓成膜濃縮，干燥，得粗品A；

4）將粗品A進(jìn)行硅膠柱層析，工藝條件為：采用100目硅膠，粗品A與硅膠質(zhì)量比：1：50，采用氯仿-甲醇體積比5：1的洗脫劑，洗脫流速為0.5倍柱體積/小時，洗脫體積為30倍量柱體積；濃縮洗脫液，干燥，得粗品B；