[發明專利]檢測核酸突變的固相載體、試劑盒和方法

有效

• 申請號: 201210320467.5
• 申請日: 2012-09-03
• 公開（公告）號: CN102899399A
• 公開（公告）日: 2013-01-30
• 發明（設計）人: 盛司潼
• 申請（專利權）人: 深圳市華因康高通量生物技術研究院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種檢測核酸突變的固相載體，其特征在于，所述固相載體表面固定有MutS；所述MutS含有報告基團；所述報告基團用于指示固相載體上MutS的數量。

2.根據權利要求1所述的檢測核酸突變的固相載體，其特征在于，所述報告基團為熒光標記基團或無熒光標記基團。

3.根據權利要求2所述的檢測核酸突變的固相載體，其特征在于，所述無熒光標記基團為辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶、生物素或鏈霉親和素。

4.根據權利要求1至3中任一項所述的檢測核酸突變的固相載體，其特征在于，所述固相載體表面為適于包被蛋白的材料。

5.根據權利要求3所述的檢測核酸突變的固相載體，其特征在于，所述材料包括天然纖維素、被修飾的纖維素、聚苯乙烯、聚丙烯、聚乙烯、聚偏氟乙烯、葡萄聚糖、尼龍、聚丙烯酰胺、瓊脂糖、橡膠、金屬、金屬氧化物、玻片、硅片和陶瓷中的至少一種。

6.一種檢測核酸突變的試劑盒，其特征在于，包括檢測核酸突變的固相載體；所述固相載體表面固定有MutS；所述MutS含有報告基團；所述報告基團用于指示固相載體上MutS的數量。

7.根據權利要求6所述的檢測核酸突變的試劑盒，其特征在于，還包括標準品；所述標準品包括陽性標準品和陰性標準品；所述陽性標準品為含有堿基錯配或由1至4個核苷酸缺失或插入引起的錯配的雙鏈核苷酸分子；所述陰性標準品為完全互補的雙鏈核苷酸分子。

8.根據權利要求6所述的檢測核酸突變的試劑盒，其特征在于，還包括用于擴增特定區域的特異性引物。

9.根據權利要求6至8中任一項所述的檢測核酸突變的試劑盒，其特征在于，所述報告基團為辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶、生物素或鏈霉親和素；所述試劑盒還包括顯色試劑；所述顯色試劑，用于與所述報告基團反應進而指示固相載體上MutS的數量。

10.一種基于權利要求1所述的檢測核酸突變的固相載體檢測核酸突變的方法，其特征在于，所述MutS所含有的報告基團為熒光標記基團或無熒光標記基團；所述熒光標記基團的熒光標記與待測樣品攜帶的熒光標記不同；所述方法包括以下步驟：

A.將帶有熒光標記的待測樣品和陰性對照品混合，變性，退火，得帶熒光標記的退火產物；所述陰性對照品為完全互補的雙鏈核酸分子，該核酸分子含有與待測樣品的待檢測區域的野生型序列完全相同的核酸序列；

B.將帶熒光標記的退火產物加至檢測核酸突變的固相載體上，使帶熒光標記的退火產物中的存在錯配的退火產物與固相載體上的MutS結合，洗滌除去未結合至固相載體上的退火產物；

C.檢測與固相載體結合的退火產物的熒光標記和固相載體上的MutS的報告基團，以確定待測樣品中是否存在突變。

11.根據權利要求10所述的檢測核酸突變的方法，其特征在于，所述步驟C包括：

C1.熒光掃描步驟B的產物，初步確定待測樣品中是否含有突變；

C2.對MutS上的報告基團進行檢測，以確定固相載體上MutS的數量；

C3.根據步驟C1和C2的結果確定待測樣品中是否存在突變。

12.根據權利要求10所述的檢測核酸突變的方法，其特征在于，步驟A之前包括步驟A0.利用帶熒光標記的特異性引物對源核酸進行擴增，得帶熒光標記的待測樣品；或利用帶熒光標記的核苷酸對源核酸進行末端標記，得帶熒光標記的待測樣品。

13.根據權利要求10至12中任一項所述的檢測核酸突變的方法，其特征在于，所述報告基團為辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶、生物素或鏈霉親和素，所述固相載體表面的材料包括硝酸纖維素膜、聚苯乙烯、聚丙烯、聚乙烯、聚偏氟乙烯和尼龍中的至少一種。

14.根據權利要求13所述的檢測核酸突變的方法，其特征在于，所述步驟C包括：

C1.熒光掃描步驟B的產物，初步確定待測樣品中是否含有突變；

C2.利用顯色試劑對MutS上的報告基團進行檢測，以確定固相載體上MutS的數量；所述顯色試劑，用于與所述報告基團反應并指示固相載體上MutS的數量；

C3.根據步驟C1和C2的結果確定待測樣品中是否存在突變。