[發明專利]一種棉花葉片蛋白質提取方法

無效

• 申請號: 201210319381.0
• 申請日: 2012-08-31
• 公開（公告）號: CN103665121A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 曲延英;陳全家;郭忠軍;孫國清
• 申請（專利權）人: 新疆農業大學
• 主分類號: C07K14/415
• 分類號: C07K14/415;C07K1/30
• 代理公司: 北京北翔知識產權代理有限公司 11285
• 代理人: 屈靜

1.一種棉花葉片蛋白質提取方法，包括以下步驟：

1）取棉花葉片，用液氮研磨；

2）經液氮研磨的葉片粉末轉入離心管中，并加入預冷的三氯乙酸提取液，混合均勻，放在－20℃冰箱中兩小時以上，每半小時震蕩一次；

3）離心管離心，棄上清，留沉淀，向沉淀中加入-20℃預冷丙酮溶液，混合均勻，于-20℃靜置2～4h；

4）離心管離心，棄上清，留沉淀，洗滌沉淀，并保留沉淀；

5）沉淀抽真空，揮發丙酮，得到蛋白質干粉；

6）取干燥的蛋白粉末，加入蛋白裂解液，35℃的水浴中裂解1h，離心，取上清，所述上清為棉花葉片蛋白溶解液。

2.根據權利要求1所述的一種棉花葉片蛋白質提取方法，其特征在于，所述三氯乙酸提取液的配方為：10%TCA，0.07%-0.1%DTT，0.5％β-巰基乙醇，1mmol/L?PMSF，溶劑為丙酮。

3.根據權利要求1所述的一種棉花葉片蛋白質提取方法，其特征在于，所述丙酮溶液含有0.07%-0.1%DTT和1mmol/L?PMSF。

4.根據權利要求1所述的一種棉花葉片蛋白質提取方法，其特征在于，所述蛋白裂解液的配方為：7mol/L尿素,2mol/L硫脲,4%CHAPS,80mmol/L?DTT,1mmol/L?PMSF，0.3%載體兩性電解質。

5.根據權利要求1-4任意一項所述的一種棉花葉片蛋白質提取方法，其特征在于，用液氮研磨葉片時加入PVPP和石英砂。

6.根據權利要求1-4任意一項所述的一種棉花葉片蛋白質提取方法，其特征在于，所述三氯乙酸提取液的用量是每0.4克葉片加入1.8mL預冷三氯乙酸提取液。

7.根據權利要求1-4任意一項所述的一種棉花葉片蛋白質提取方法，其特征在于，步驟4）所述沉淀重復洗滌3次或3次以上，或過夜洗滌，至接近白色。

8.根據權利要求1-4任意一項所述的一種棉花葉片蛋白質提取方法，其特征在于，所述蛋白裂解液的用量是每毫克干燥蛋白干粉加入蛋白裂解液20μl。