[發(fā)明專利]一種酶法制備L-二氫乳清酸的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210316992.X
• 申請日: 2012-08-31
• 公開（公告）號: CN102787147A
• 公開（公告）日: 2012-11-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 曹飛;黃榮醒;武紅麗;周佳棟;張煜;姚琴
• 申請（專利權(quán)）人: 南京工業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12P17/12
• 分類號: C12P17/12;C12R1/19
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標(biāo)代理有限公司 32200
• 代理人: 李紀(jì)昌

1.一種酶法制備L-二氫乳清酸的方法，其特征在于包括下列步驟：

1）以氰酸鹽、L-天冬氨酸或者L-天冬氨酸鹽為原料，在堿性條件下進(jìn)行反應(yīng)，形成N-氨甲酰-L-天冬氨酸，氰酸鹽與L-天冬氨酸或者L-天冬氨酸鹽的摩爾比為1~1.4:1；

2）以二氫乳清酸酶或含有二氫乳清酸酶的菌體為催化劑，在弱酸性條件下，催化步驟1)得到的N-氨甲酰-L-天冬氨酸環(huán)合得到含L-二氫乳清酸的溶液；?3）將所得含L-二氫乳清酸的溶液分離，濃縮，結(jié)晶，獲得L-二氫乳清酸。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶法制備L-二氫乳清酸的方法，其特征在于步驟1）中，所述的L-天冬氨酸鹽為L-天冬氨酸的鈉、鉀鹽中的任意一種。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶法制備L-二氫乳清酸的方法，其特征在于步驟1）中，所述的氰酸鹽為氰酸鈉或氰酸鉀。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶法制備L-二氫乳清酸的方法，其特征在于步驟1）中，所述的堿性條件為pH8.5~10.0。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶法制備L-二氫乳清酸的方法，其特征在于步驟2）中，所述的菌體為大腸桿菌K-12；所述的二氫乳清酸酶為含有二氫乳清酸酶基因pET-22b(+)-DHO-his質(zhì)粒的重組菌株E.coliRosetta(DE3)所表達(dá)、純化的二氫乳清酸酶。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶法制備L-二氫乳清酸的方法，其特征在于步驟2）中，所述的弱酸性條件為pH2.0~4.0。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的酶法制備L-二氫乳清酸的方法，其特征在于步驟2）中，二氫乳清酸酶或含有二氫乳清酸酶的菌體與N-氨甲酰-L-天冬氨酸的重量比為1:1~80。