[發(fā)明專利]一種青霉素類藥物通用半抗原、人工抗原、廣譜單克隆抗體及其制備方法與應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210315737.3
• 申請日: 2012-08-25
• 公開（公告）號: CN102827188A
• 公開（公告）日: 2012-12-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王建平;趙國先;焦賽南;張會彩;劉靜
• 申請（專利權(quán)）人: 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C07D499/21
• 分類號: C07D499/21;C07D499/10;C07K14/77;C07K14/765;C07K1/113;G01N33/577
• 代理公司: 保定市燕趙恒通知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 13121
• 代理人: 周獻(xiàn)濟(jì)

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及食品安全領(lǐng)域，具體涉及一種青霉素類藥物的通用半抗原、人工抗原和廣譜單克隆抗體及其制備方法與應(yīng)用。?

背景技術(shù)

青霉素類藥物是一類能破壞細(xì)菌細(xì)胞壁并在細(xì)菌繁殖期起殺菌作用的抗生素，主要包括芐青霉素、甲氧西林、羧芐西林、氨芐西林、阿莫西林、苯唑西林、氯唑西林、雙氯西林等。此類藥物主要對革蘭氏陽性菌有效，對革蘭陽性球菌及革蘭陽性桿菌、螺旋體、梭狀芽孢桿菌、放線菌以及部分?jǐn)M桿菌也有抗菌作用。因此，青霉素類藥物在畜牧養(yǎng)殖業(yè)中被大量用于治療動物的多種細(xì)菌性疾病。?

但青霉素類藥物對畜禽有一定的毒性，動物大劑量或長期連續(xù)服用青霉素類藥物易引起毒性反應(yīng)，引起動物抽搐、大小便失禁、甚至癱瘓等。更重要的是，青霉素類藥物大量使用會在動物性食品中造成殘留而被消費者食入，這對人類身體健康有巨大危害。因此，世界各國都對動物性食品中殘留的青霉素類藥物進(jìn)行嚴(yán)格的監(jiān)控，并且規(guī)定了多種青霉素類藥物在不同動物性食品中的最高殘留限量，如中國農(nóng)業(yè)部規(guī)定幾種青霉素類藥物在牛奶中的最高殘留限量為：青霉素，4ng/mL；阿莫西林，10ng/mL；氨芐西林，10ng/mL。?

目前，國內(nèi)外己發(fā)表的有關(guān)青霉素類藥物殘留檢測的方法有高效液相色譜法(HPLC)、液相色譜一質(zhì)譜法(LC-MS)、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)。這些常用方法實際操作中需要有昂貴的儀器，且前處理復(fù)雜、繁瑣、操作時間長、操作技術(shù)要求高。?

免疫分析方法有很高的精確度、靈敏性和特異性，且對技術(shù)要求不高，具有檢測時間短，適用于大批量測定等優(yōu)點。免疫分析法的核心試劑是抗體。目前已有的針對青霉素類藥物的免疫分析報道中，均是以某一種青霉素類藥物為基礎(chǔ)去制備抗體，所得抗體只對該藥物有較高識別能力，而對其他青霉素類藥物識別能力低，也就是說不能識別所有青霉素類藥物。?

因此，提供一種廣譜適用的青霉素類藥物免疫分析用抗體就成為該技術(shù)領(lǐng)域急需解決的技術(shù)難題。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的之一是提供一種青霉素類藥物的通用半抗原。?

本發(fā)明的上述發(fā)明目的是通過以下技術(shù)方案達(dá)到的：?

一種青霉素類藥物的通用半抗原，其分子結(jié)構(gòu)式如式I所示：?

式I。?

本發(fā)明的目的之二是上述青霉素類藥物通用半抗原的制備方法。?

本發(fā)明的上述發(fā)明目的是通過以下技術(shù)方案達(dá)到的：?

一種青霉素類藥物通用半抗原的制備方法，包括如下步驟：?

(a)將6-氨基青霉素酸的二氧六環(huán)溶液與對羥基苯甲醛的二氧六環(huán)溶液混合后，加熱回流；?

(b)反應(yīng)完全后，冷卻，抽濾，水洗得到式I結(jié)構(gòu)的化合物。?

所用6-氨基青霉烷酸和對羥基苯甲醛的摩爾比為1∶1～2，優(yōu)選1∶1。?

本發(fā)明的目的之三是提供一種青霉素類藥物的通用人工抗原。?

本發(fā)明的上述發(fā)明目的是通過以下技術(shù)方案達(dá)到的：?

一種青霉素類藥物的通用人工抗原，其分子結(jié)構(gòu)式如式II所示：?

式II。?

一種優(yōu)選技術(shù)方案，其特征在于：所述的載體蛋白為卵清蛋白或牛血清白蛋白。?

本發(fā)明的目的之四是提供一種青霉素類藥物通用人工抗原的制備方法。?

本發(fā)明的上述發(fā)明目的是通過以下技術(shù)方案達(dá)到的：?

一種青霉素類藥物通用人工抗原的制備方法，包括如下步驟：?

(a)將N，N-羥基二咪唑和式I結(jié)構(gòu)化合物溶于無水丙酮，將該溶液在37℃振蕩培養(yǎng)箱中反應(yīng)2小時，反應(yīng)后使丙酮揮發(fā)，得到中間產(chǎn)物，將該中間產(chǎn)物溶解于磷酸鹽緩沖溶液中，得到溶液A；?

(b)將所述載體蛋白溶解于磷酸鹽緩沖溶液中，得到溶液B；?

(c)將所述溶液B滴加至所述溶液A中，得到式II結(jié)構(gòu)的人工抗原。?

一種優(yōu)選技術(shù)方案，其特征在于還包括如下步驟：?

(d)將由步驟(c)得到的人工抗原在4～20℃用磷酸鹽緩沖溶液透析48～84小時，優(yōu)選在4℃透析72小時。?

將透析后的青霉素類藥物通用人工抗原進(jìn)行離心，所述離心過程中，轉(zhuǎn)速為6000轉(zhuǎn)/分鐘，時間為10分鐘。?

本發(fā)明的目的之五是提供一種上述青霉素類藥物通用人工抗原制備的廣譜單克隆抗體。?

本發(fā)明的上述發(fā)明目的是通過以下技術(shù)方案達(dá)到的：?

一種青霉素類藥物通用人工抗原產(chǎn)生的廣譜單克隆抗體，是能與所述青霉素類藥物通用人工抗原發(fā)生特異性免疫反應(yīng)的免疫球蛋白。?