[發明專利]定向誘導合成金屬硫蛋白的工藝

有效

• 申請號: 201210315550.3
• 申請日: 2012-08-31
• 公開（公告）號: CN102786591A
• 公開（公告）日: 2012-11-21
• 發明（設計）人: 徐華民;趙榮華;趙艷琨;徐萌
• 申請（專利權）人: 哈爾濱工業大學
• 主分類號: C07K14/825
• 分類號: C07K14/825;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/16;A01K67/033
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.定向誘導合成金屬硫蛋白的工藝，其特征在于所述工藝如下：

（1）選擇合適的原材料配制培養基；

（2）上述培養基噴淋去離子水，保持溫度25~45℃，時間48~120h，使培養基充分發酵；

（3）將九龍蟲雄蟲與雌蟲按2：3比例混合，保持溫度25~30℃，濕度60~85%，雄蟲與雌蟲交配5~7天產卵，蟲卵在8~12天孵化出幼蟲，收集幼蟲；

（4）將5~8g幼蟲置于前述的發酵培養基中，保持溫度20~30℃、濕度60~85%培養，待幼蟲第一次脫皮后超聲波振蕩培育；

（5）待幼蟲脫皮6次后的第4~6天，收集九龍蟲幼蟲，用去離子水清洗，甩干九龍蟲幼蟲表面水分；

（6）甩干的九龍蟲幼蟲搗碎，加熱80~100℃，時間5~10min，離心分離，收集分離液；

（7）分離液進行微濾與超濾處理，收集濃縮液；

（8）100mL濃縮液溶于1000~2000mL溶劑體系中，泵入超聲駐波液相制備色譜里連續分離純化金屬硫蛋白；

（9）將分離純化的金屬硫蛋白冷凍干燥至成品。

2.根據權利要求1所述的定向誘導合成金屬硫蛋白的工藝，其特征在于所述步驟（1）中，培養基由1000g麥麩或米糠、50~200g大豆豆粉、0~20g賴氨酸、0~20g甘氨酸、10~80g胱氨酸、10~20gCuSO₄、5~20gNaCl、0~20gCdSO₄、0~10gCaSO₄、0~20gZnSO₄混合而成。

3.根據權利要求2所述的定向誘導合成金屬硫蛋白的工藝，其特征在于所述培養基由1000g麥麩、100~200g大豆豆粉、10~20g賴氨酸、50~80g胱氨酸、10~15gCuSO₄、5~10gNaCl、10~20gCdSO₄、5~10g?CaSO₄混合而成。

4.根據權利要求2所述的定向誘導合成金屬硫蛋白的工藝，其特征在于所述培養基由1000g米糠、50~100g大豆蛋白粉、10~20g甘氨酸、10~20g胱氨酸、10~20gCuSO₄、10~20gNaCl、10~20gZnSO₄混合而成。

5.根據權利要求1所述的定向誘導合成金屬硫蛋白的工藝，其特征在于所述步驟（4）中，每間隔8~10h重復超聲處理一次，幼蟲培育周期50~80d，超聲波振蕩頻率為250~500kHz，功率為0.1~0.5kw，時間為2~10min。

6.根據權利要求1所述的定向誘導合成金屬硫蛋白的工藝，其特征在于所述步驟（7）中，分離液用膜孔徑0.5~1.0μm微孔膜過濾機過濾，再用膜孔徑10~120nm超濾機濃縮。

7.根據權利要求1所述的定向誘導合成金屬硫蛋白的工藝，其特征在于所述步驟（8）中，溶劑體系由質量比4.5%PEG6000-質量比8.0%葡萄糖T600組成。

8.根據權利要求1所述的定向誘導合成金屬硫蛋白的工藝，其特征在于所述步驟（8）中，溶劑體系由亞丁醇-乙醚-水按照10：5：12體積比組成。

9.根據權利要求1所述的定向誘導合成金屬硫蛋白的工藝，其特征在于所述步驟（8）中，超聲頻率500~1000kHz，功率0.1~1.5kw，流速20~100ml/min，紫外檢測器波長220nm。

10.根據權利要求1所述的定向誘導合成金屬硫蛋白的工藝，其特征在于所述步驟（9）中，分離純化的金屬硫蛋白用真空冷凍干燥機在真空度10~50kPa、溫度-30~50℃、時間15~24h干燥含水份5~6%為成品。