[發明專利]一種視黃醇檢測試劑盒及其制備方法

無效

• 申請號: 201210312846.X
• 申請日: 2012-08-30
• 公開（公告）號: CN102841210A
• 公開（公告）日: 2012-12-26
• 發明（設計）人: 謝兵
• 申請（專利權）人: 謝兵
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于生物醫藥技術領域，具體地說涉及一種檢測人視黃醇結合蛋白的檢測試劑盒。?

背景技術

視黃醇結合蛋白，是血漿中特異結合維生素A的結合蛋白，在維生素A的代謝中起重要作用。?

視黃醇結合蛋白的臨床檢測有助于肝炎、糖尿病早期診斷、腎臟疾病的診斷。?

視黃醇結合蛋白主要由肝臟粗面內質網合成。廣泛分布于人體血清、尿液、腦脊液中。在血液中視黃醇結合蛋白以復合物形式存在。當肝細胞損傷時．視黃醇結合蛋白的合成受到抑制。由于視黃醇結合蛋白的半衰期為3～12小時。其相對分子量小，且與血清總膽紅素、白蛋白、凝血酶原時間相關。所以它可敏感地反映肝功能的改變。同時急性病毒性肝炎患者血清視黃醇結合蛋白含量與AST、ALP、ALT負相關。故可說明血清視黃醇結合蛋白是反映肝細胞受損的靈敏指標。?

尿視黃醇結合蛋白是一種低分子蛋白，可在腎小球濾過膜自由濾過并絕大部分被腎近曲小管重吸收而分解代謝。正常情況下，尿視黃醇結合蛋白排泌量甚微，當腎近曲小管受損時，尿視黃醇結合蛋白排泌量明顯增加。因此測定尿視黃醇結合蛋白水平能更靈敏地反映腎小管的功能情況，且特異性較高。?

視黃醇結合蛋白本身具有很好的穩定性，在體內的含量相對恒定，一般情況下，正常人尿中視黃醇結合蛋白的含量極少，故有學者認為其在尿中的排泄量可作為腎小管功能受損的一個靈敏指標，能早期反映腎小管的損害問。研究表明，在糖尿病早期尚未發生腎小球功能障礙時，已存在腎小管的功能損傷。而在診斷糖尿病腎小管損害時，尿視黃醇結合蛋白可作為早期糖尿病腎病的一個更敏感的診斷指標。為早期糖尿病腎病的診斷提供依據。以使患者得到及時的診治，改善預后，提高生存質量。?

視黃醇結合蛋白測定方法很多，包括：(一)放射免疫測定法(RIA)、(二)酶聯免疫測定法(ELISA)、(三)乳膠凝集試驗和免疫比濁法、(四)?熒光免疫測定法、(五)滴金免疫法。這些方法具有操作繁瑣、耗時長、過度浪費資源的缺點，不適于常規檢驗。?

發明內容

本發明的目的是提供一種視黃醇結合蛋白的檢測試劑盒。該試劑盒可直接應用于全自動生化分析儀上，結果準確性強、試劑穩定性好、使用方便、便于大規模推廣。?

本發明的另一目的是提供上述檢測試劑盒的生產制備及使用方法。?

為實現上述目的，本發明提供的試劑盒組成為：?

試劑R1：緩沖液、聚乙二醇、疊氮鈉、乙二胺四乙酸鈉、牛血清白蛋白；

試劑R2：緩沖液、結合有視黃醇結合蛋白單克隆抗體的乳膠粒子、吐溫-20、疊氮鈉、乙二胺四乙酸鈉、牛血清白蛋白。

本發明提供的上述試劑盒的制備方法及操做步驟如下：?

（a）按下列比例配制好試劑：

試劑R1：

Tris緩沖液??????200-220mmol/L

聚乙二醇????????5-10?mmol/L

疊氮鈉??????????1-5?mmol/L

乙二胺四乙酸鈉??1-5mmol/L

牛血清白蛋白????1-5mmol/L；

試劑R2：

Tris緩沖液??????200-220mmol/L

結合有視黃醇結合蛋白單克隆抗體的乳膠粒子???3.5-5%（v/v）

吐溫-20?????????1-5mmol/L

疊氮鈉??????????0.5-3?mmol/L

乙二胺四乙酸鈉??1-5mmol/L

牛血清白蛋白????1-5mmol/L

（b）將試劑與待測樣本按一定比例混合，使其完全反應；

（c）用半/全自動生化分析儀測定吸光度變化值；

（d）根據吸光度變化值計算出樣本中視黃醇結合蛋白的濃度。

具體實施方式

下述實施例是為了更詳細的解釋本發明，但不應理解為本發明局限于此。?

實施例1：?

本發明的試劑盒舉例是雙試劑，其中：

試劑R1：

Tris緩沖液??????200mmol/L

聚乙二醇????????8?mmol/L

疊氮鈉??????????5?mmol/L

乙二胺四乙酸鈉??5mmol/L

牛血清白蛋白????5mmol/L；

試劑R2：

Tris緩沖液??????200mmol/L

結合有視黃醇結合蛋白單克隆抗體的乳膠粒子???5%（v/v）