[發明專利]一種10－DAB的提取純化方法

在審

• 申請號: 201210312126.3
• 申請日: 2012-08-29
• 公開（公告）號: CN102827106A
• 公開（公告）日: 2012-12-19
• 發明（設計）人: 盧國定
• 申請（專利權）人: 寧波綠之健藥業有限公司
• 主分類號: C07D305/14
• 分類號: C07D305/14
• 代理公司: 南京眾聯專利代理有限公司 32206
• 代理人: 張慧清

技術領域

本發明涉及醫藥技術領域，特別是中藥技術領域，更為具體的說是涉及一種10－DAB的提取純化方法。

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背景技術

紫杉醇是從紅豆杉莖的皮部分離得到的一種具有獨特抗癌活性的二萜類化合物。主要用于治療卵巢癌和乳腺癌等，目前其應用范圍已經擴大到肺癌、頭頸部癌、軟組織癌、白血病以及胃腸道癌，被認為是迄今人類發現的最有效的抗癌藥物。

然而紫杉醇在植物體內的含量甚微，在一般的干樹皮中含量僅有0.01%，同時，作為原料使用的紅豆杉資源有限，因此，尋找其他紫杉醇的獲取途徑，成為目前人們一直努力解決的技術問題。

已經有人發現了紫杉醇的化學合成法，是以在紅豆杉枝葉中含量較高的10－去乙酰基巴卡亭Ⅲ（10－DAB）作為原料，通過半合成的方式得到紫杉醇以及其類似物紫杉特爾。通過這一化學合成法制備紫杉醇或者其類似物，無論從功能性還是經濟效益方面考慮，都具有極大的可行性。

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發明內容

本發明的目的是提供一種從紅豆杉中分離純化10－DAB的制備方法。

為了實現上述發明目的，本發明公開了以下技術方案：

一種10－DAB的提取純化方法，所述10－DAB是以紅豆杉枝葉為原料，包括以下步驟：

（1）將紅豆杉枝葉破碎，并加入中極性和/或高極性有機溶劑40～60℃提取，過濾，取上清液；

（2）將上清液在50～70℃下減壓濃縮至原體積的40%～50%，加入水溶液，靜置，分層，取水層；

（3）向水層中加入二氯甲烷和/或乙酸乙酯，萃取4次以上，合并萃取層，減壓濃縮，得浸膏；

（4）加入浸膏2～4倍量的有機溶劑，冷凍結晶，離心，過濾，取固體1，所述有機溶劑為乙腈、甲醇、甲苯中的一種或幾種；

（5）向步驟（4）中制備得到的結晶中加入10～20倍量的有機溶劑，加入活性炭，混合均勻，加熱脫色，過濾，取濾液，減壓濃縮后，冷凍結晶，離心，過濾，取固體，烘干得10－DAB粗品，所述有機溶劑為乙腈、甲醇、甲苯中的一種或幾種；

（6）將10－DAB與硅膠混合均勻，以洗脫液洗脫，在線TLC分析，分段收集洗脫液，所述洗脫液由乙酸乙酯、丙酮中的一種或幾種，與正己烷、正庚烷、二氯甲烷、石油醚中的一種或幾種以8：2的混合比例混合而成；

（7）反復按照步驟（6）進行反相色譜分離洗脫，收集95%以上純度的洗脫液，合并洗脫液，濃縮；

（8）向濃縮物中加入甲醇與乙酸乙酯的混合溶液重結晶，過濾，干燥，得10－DAB純品。

步驟（1）中，所述中極性和/或高極性有機溶劑為甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯中的一種或幾種。

所述步驟（1）中，所述有機溶劑與紅豆杉枝葉的液固比為（8～12）：1。

所述步驟（2）中水溶液的加入量為濃縮液的1/10（體積比）。

所述步驟（3）中每次萃取時攪拌3～5分鐘。

所述步驟（3）中水層與有機溶劑的比例為1：1（體積比）。

所述步驟（5）中活性炭加入量為0.5%～0.8%（質量體積百分比）。

所述步驟（6）中硅膠與10－DAB質量比為（10～15）：1。

所述步驟（8）中重結晶溶液由甲醇與乙酸乙酯以（0.5～0.8）：1的體積比混合而成。

所述步驟（4）或（5）中所述的冷凍結晶為－5℃下冷凍結晶10小時以上。

本發明通過二次結晶與反相色譜相結合的純化方式，以甲醇與乙酸乙酯為重結晶溶液，對純品進行精制，成品純度可達到99.5%，收率在80%以上。

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具體實施方式

下面結合具體實施方式對本發明進行進一步的闡述。

在本發明中除特別說明外，所使用原料、試劑、儀器均為市售產品。

實施例1

一種10－DAB的提取純化方法，所述10－DAB是以紅豆杉枝葉為原料，包括以下步驟：

（1）將紅豆杉枝葉破碎，并加入中極性和/或高極性有機溶劑40～60℃提取，過濾，取上清液；

（2）將上清液在50～70℃下減壓濃縮至原體積的40%～50%，加入水溶液，靜置，分層，取水層；

（3）向水溶液層中加入二氯甲烷和/或乙酸乙酯，萃取4次以上，合并萃取層，減壓濃縮，得浸膏；

（4）加入浸膏2～4倍量的有機溶劑，冷凍結晶，離心，過濾，取固體1，所述有機溶劑為乙腈、甲醇、甲苯中的一種或幾種；