[發(fā)明專利]昆蟲細(xì)胞系的建立方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210309763.5
• 申請日: 2012-08-28
• 公開（公告）號: CN102776149A
• 公開（公告）日: 2012-11-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 馮穎;張欣;丁偉峰;李嫻;馬濤;孫龍;何釗
• 申請（專利權(quán)）人: 中國林業(yè)科學(xué)研究院資源昆蟲研究所
• 主分類號: C12N5/07
• 分類號: C12N5/07;C12R1/91
• 代理公司: 昆明正原專利商標(biāo)代理有限公司 53100
• 代理人: 徐玲菊

1.一種昆蟲細(xì)胞系的建立方法，其特征在于經(jīng)過下列步驟：

1）用質(zhì)量濃度為65～80%的酒精溶液，對昆蟲蟲體進(jìn)行滅菌處理1～5min，用無菌水洗2～4次，用濾紙吸去水份；

2）在顯微鏡下挑取步驟1）的昆蟲放入PBS溶液進(jìn)行常規(guī)清洗；

3）將步驟2）的清洗昆蟲轉(zhuǎn)入裝有質(zhì)量濃度為0.10～0.25%的胰酶溶液的1.5～2ml離心管中，將昆蟲剪碎至0.5～1mm³，消化處理5～10min，得昆蟲細(xì)胞懸液；

4）將步驟3）的細(xì)胞懸液吸入12.5～25cm²的培養(yǎng)瓶中，每瓶裝入量為0.5～1ml，用改良培養(yǎng)基補(bǔ)足至4～5ml，所述每1000毫升改良培養(yǎng)基中含有下列組分：

Grace培養(yǎng)基?????????????40～50g

海藻糖??????????????????0.5～3g

酵母抽提物???????????????0.5～3g

胎牛血清??????????????100～200ml

水??????????????????????????余量；

5）將步驟4）的裝有細(xì)胞懸液及改良培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶，置于25～28℃的培養(yǎng)箱中，密閉無光照培養(yǎng)至細(xì)胞增殖并生長至鋪滿甁底；

6）將步驟5）的鋪滿甁底的細(xì)胞進(jìn)行常規(guī)懸浮并混勻后，以2:1或3:1的比例分瓶，并加入新鮮的改良培養(yǎng)基補(bǔ)充至4～5ml，繼續(xù)在密閉無光照培養(yǎng)條件下培養(yǎng)至細(xì)胞增殖，如此傳代培養(yǎng)至50代，使昆蟲細(xì)胞系建立。