[發明專利]制備美登木素生物堿抗體綴合物的方法

有效

• 申請號: 201210308200.4
• 申請日: 2006-08-14
• 公開（公告）號: CN102989000A
• 公開（公告）日: 2013-03-27
• 發明（設計）人: 戴勇;王勇;晉圣瑾;D·H·梅舒拉姆;G·W·阿姆弗萊特
• 申請（專利權）人: 伊繆諾金公司
• 主分類號: A61K47/48
• 分類號: A61K47/48;A61P35/00
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 袁志明

本申請是申請號為200680034242.6、申請日為2006年8月14日、發明名稱為“制備美登木素生物堿抗體綴合物的方法”的專利申請的分案申請。

技術領域

本發明涉及制備相當高純度和穩定性的綴合物的方法，其中所述綴合物包含與藥物化學偶聯的細胞結合劑。

背景技術

隨著更有效地靶向并殺滅癌細胞的藥物開發，癌癥治療取得顯著的進步。為了這個目的，研究人員利用癌細胞選擇性表達的細胞表面受體和抗原，來開發基于抗體的藥物，所述抗體與腫瘤特異性或腫瘤相關性抗原結合。在這點上，已將細胞毒性分子例如細菌和植物毒素、放射性核素和某些化學治療藥物與單克隆抗體化學連接，所述單克隆抗體與腫瘤特異性或腫瘤相關性抗原結合(參見，例如，國際專利申請WO?00/02587、WO?02/060955和WO?02/092127，美國專利5,475,092、6,340,701和6,171,586，美國專利申請公布號2003/0004210A1，和Ghetie等,J.Immunol.Methods,112:267-277(1988))。通常將這類化合物分別稱為毒素、放射性核素和藥物“綴合物”。常常也將它們稱作免疫綴合物、放射免疫綴合物和免疫毒素。在藥物綴合物與腫瘤細胞結合并釋放藥物或/和激活藥物的細胞毒活性時，發生腫瘤細胞殺滅。藥物綴合物所提供的選擇性使對正常細胞的毒性降到最低，因此提高了藥物在患者中的耐受性。

先前已經描述了將抗體與含巰基的細胞毒性劑例如美登木素生物堿綴合的方法(參見，例如，美國專利5,208,020、5,416,064和6,441,163)。例如，美國專利5,208,020和5,416,064公開了制備抗體-美登木素生物堿綴合物的方法，其中首先用異雙功能試劑（例如美國專利4,149,003、4,563,304和美國專利申請公布號2004/0241174A1中所述的）修飾抗體。美國專利5,208,020和5,416,064進一步描述了經修飾的抗體與過量的含巰基的細胞毒性劑在pH?7的綴合，隨后經Sephadex^TMG25色譜柱純化。也描述了用尺寸排阻色譜法(SEC)純化抗體－藥物綴合物(參見，例如,Liu等,Proc.Natl.Acad.Sci?(USA),93:8618-8623(1996)和Chari等,Cancer?Research,52:127-131(1992))。

先前描述用于制備抗體－藥物綴合物的方法是復雜的，因為它們被用于執行或生產免疫綴合物的累贅步驟所阻礙，與最佳期望的相比，所述免疫綴合物純度更低或更不穩定。例如,在pH為6.0～6.5之間的綴合對于生產純凈和穩定的綴合物來說不是最佳的。此外，在這些條件下的綴合反應通常是緩慢和無效率的，導致需要應用過度的時間和材料。

改變或消除一個或多個制備步驟，而不損害產物質量例如純度和/或穩定性，將是理想的。進一步理想的是，具有除迄今為止所述的那些之外的另外的純化選擇，因為一些使用細胞結合劑、連接體和藥物的某些組合的選擇比使用其它的將更有效。

鑒于前文所述，在本領域中存在如下需求：開發改進的制備具有相當高純度和同時具有更大穩定性的細胞結合劑-藥物綴合物組合物的方法。本發明提供這樣的方法。根據本文提供的本發明的說明，本發明的這些和其它優點以及另外的發明特征將是明顯的。

發明內容

發明簡要概述

本發明提供一種制備相當高純度和穩定性的綴合物的方法，該綴合物包含與藥物化學偶聯的細胞結合劑。該方法包括(a)用雙功能交聯試劑與細胞結合劑接觸，以使連接體與細胞結合劑共價連接，從而制備第一混合物，該混合物包含其上結合了連接體的細胞結合劑，(b)使第一混合物經受切向流過濾、吸附色譜法、吸附過濾、選擇性沉淀或它們的組合，從而制備純化的其上結合了連接體的細胞結合劑的第一混合物，(c)通過在pH為大約4至大約9的溶液中將其上結合了連接體的細胞結合劑與藥物起反應，以制備第二混合物，該混合物包含(i)通過連接體與藥物化學偶聯的細胞結合劑、(ii)游離藥物和(iii)反應副產物，來使藥物與純化的第一混合物中其上結合了連接體的細胞結合劑綴合，以及(d)使第二混合物經受切向流過濾、吸附色譜法、吸附過濾、選擇性沉淀或它們的組合，以從第二混合物的其它成分中純化通過連接體與藥物化學偶聯的細胞結合劑，從而制備純化的第二混合物。

發明詳述