[發明專利]制備美登木素生物堿抗體綴合物的方法

有效

• 申請號: 201210308200.4
• 申請日: 2006-08-14
• 公開（公告）號: CN102989000A
• 公開（公告）日: 2013-03-27
• 發明（設計）人: 戴勇;王勇;晉圣瑾;D·H·梅舒拉姆;G·W·阿姆弗萊特
• 申請（專利權）人: 伊繆諾金公司
• 主分類號: A61K47/48
• 分類號: A61K47/48;A61P35/00
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 袁志明

1.制備抗體-細胞毒性劑綴合物的方法，該方法包括下列步驟：

(a)用雙功能交聯試劑接觸抗體，以使連接體與抗體共價連接，從而制備第一混合物，該混合物包含其上結合了連接體的抗體,

(b)通過在pH為大約4至大約9的溶液中使其上結合了連接體的抗體與細胞毒性劑起反應，使細胞毒性劑與第一混合物中其上結合了連接體的抗體綴合，以制備第二混合物，該混合物包含(i)通過連接體與細胞毒性劑化學偶聯的抗體，(ii)游離細胞毒性劑和(iii)步驟(b)期間產生的反應副產物，以及

(c)使第二混合物經受切向流過濾、選擇性沉淀、吸附過濾、吸附色譜法或其組合，以從第二混合物的其它成分中純化通過連接體與細胞毒性劑化學偶聯的抗體，從而制備純化的通過連接體與細胞毒性劑化學偶聯的抗體的第二混合物；

其中所述第一混合物不經受純化。

2.權利要求1的方法，其中所述的吸附色譜法選自羥磷灰石色譜法、疏水電荷誘導色譜法、疏水作用色譜法、離子交換色譜法、混合式離子交換色譜法、固定化金屬離子親和色譜法、染料配體色譜法、親和色譜法、反相色譜法及其組合。

3.權利要求1的方法，其中步驟(b)中的溶液的pH為大約4至大約6.0。

4.權利要求1的方法，其中步驟(b)中的溶液的pH為大約6.5至大約9。

5.權利要求1的方法，其中步驟(b)中的溶液包含蔗糖。

6.權利要求1的方法，其中步驟(b)中的溶液包含緩沖劑，其選自檸檬酸鹽緩沖劑、乙酸鹽緩沖劑、琥珀酸鹽緩沖劑和磷酸鹽緩沖劑。

7.制備抗體-細胞毒性劑綴合物的方法，該方法包括下列步驟:

(a)用雙功能交聯試劑接觸抗體，以使連接體與抗體共價連接，從而制備第一混合物，該混合物包含其上結合了連接體的抗體,

(b)使第一混合物經受選擇性沉淀、吸附過濾或吸附色譜法，從而制備純化的其上結合了連接體的抗體的第一混合物，

(c)通過在pH為大約4至大約9的溶液中使其上結合了連接體的抗體與細胞毒性劑起反應，使細胞毒性劑與純化的第一混合物中其上結合了連接體的抗體綴合，以制備第二混合物，該混合物包含(i)通過連接體與細胞毒性劑化學偶聯的抗體，(ii)游離細胞毒性劑和(iii)反應副產物，以及

(d)使第二混合物經受切向流過濾、選擇性沉淀、吸附過濾或吸附色譜法，以從第二混合物的其它成分中純化通過連接體與細胞毒性劑化學偶聯的抗體，從而制備純化的通過連接體與細胞毒性劑化學偶聯的抗體的第二混合物。

8.權利要求7的方法，其中在步驟(d)中使用切向流過濾。

9.權利要求7的方法，其中在步驟(b)中使用吸附色譜法，并在步驟(d)中使用切向流過濾。

10.制備抗體-細胞毒性劑綴合物的方法，該方法包括下列步驟:

(a)用雙功能交聯試劑接觸抗體，以使連接體與抗體共價連接，從而制備第一混合物，該混合物包含其上結合了連接體的抗體，

(b)使第一混合物經受切向流過濾、選擇性沉淀、吸附過濾或吸附色譜法，從而制備純化的其上結合了連接體的抗體的第一混合物，

(c)通過在pH為大約4至大約9的溶液中使其上結合了連接體的抗體與細胞毒性劑起反應，使細胞毒性劑與純化的第一混合物中其上結合了連接體的抗體綴合，以制備第二混合物，該混合物包含(i)通過連接體與細胞毒性劑化學偶聯的抗體、(ii)游離細胞毒性劑和(iii)反應副產物，以及

(d)使第二混合物經受選擇性沉淀、吸附過濾或吸附色譜法，以從第二混合物的其它成分中純化通過連接體與細胞毒性劑化學偶聯的抗體，從而制備純化的通過連接體與細胞毒性劑化學偶聯的抗體的第二混合物，

條件是，如果在步驟(b)中所述第一混合物經受切向流過濾，那么在步驟(d)中所述第二混合物不經受吸附色譜法。

11.權利要求10的方法，其中在步驟(b)和(d)中使用吸附色譜法。

12.權利要求7～11任何一項的方法，其中所述的吸附色譜法選自羥磷灰石色譜法、疏水電荷誘導色譜法、疏水作用色譜法、離子交換色譜法、混合式離子交換色譜法、固定化金屬離子親和色譜法、染料配體色譜法、親和色譜法、反相色譜法及其組合。