[發明專利]復雜天然產物中活性成分篩選方法及應用

有效

• 申請號: 201210307022.3
• 申請日: 2012-08-27
• 公開（公告）號: CN102818868A
• 公開（公告）日: 2012-12-12
• 發明（設計）人: 程翼宇;王毅;張玉峰
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 張法高;趙杭麗

1.一種復雜天然產物中活性成分篩選方法，其特征在于，通過以下步驟實現：?

（1）樣品并行制備

將待測樣品配制成溶液，分別取10-50μL溶液，通過自動進樣器或手動進樣器注入并行制備系統，所述的并行制備系統由二元液相色譜泵，5根并行連接的色譜柱以及4臺餾分收集儀組成，將其中4根色譜柱的洗脫液，采用4臺自動餾分收集儀分別收集至4塊微孔板，每孔中餾分體積根據微孔板容積確定；

（2）樣品分析

　　將上述并行制備系統中剩余1根色譜柱的洗脫液通過管線與紫外/可見光檢測器相連，然后再接入電噴霧－質譜儀，對步驟(1)制備的樣品進行定性分析；

（3）樣品處理

　　通過離心濃縮方法，揮干4塊收集有相同餾分的微孔板中的溶液，再加入溶劑溶解后，作為活性評價的待測樣品；

（4）活性評價

　　在微孔板上，采用基于細胞、酶或者化學反應的活性評價方法對微孔板中各孔對應的餾分的活性進行評價，篩選其中具有顯著活性的餾分；?

（5）活性成分篩選

綜合處理液相色譜－質譜聯用分析數據和活性評價數據，確定活性餾分在液相色譜－質譜聯用分析圖譜中的位置，并進一步提取與該餾分相對應的化合物的紫外光譜、分子量、分子碎片等化學信息，推斷活性化合物結構，篩選出活性成分。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述待測樣品為天然產物提取物、中藥提取物或含多種化學成分的混合物樣品。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（4）所述基于細胞的活性評價方法包括腫瘤細胞的細胞活力測試、損傷的內皮細胞及心肌細胞活力測試，用于評價餾分的抗腫瘤、內皮保護及心肌保護活性；基于酶的活性評價方法包括alpha-葡萄糖苷酶、脂肪酶、酪氨酸酶、乙酰膽堿酯酶等酶活力測，用于評價餾分的酶抑制活性；基于化學反應的活性評價方法包括自由基清除活力測試，用于評價餾分的抗氧化活性。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（5）通過制備純化目標化合物或購買目標化合物標準品等方式，獲取活性成分，再采用活性評價方法驗證目標化合物的藥效活性。

5.根據權利要求1或2所述的方法在復雜天然產物中篩選活性成分中的應用，所述復雜天然產物包括天然產物提取物、中藥提取物或含多種化學成分的混合物。